Cre/loxP重组酶系统是对转基因受体细胞DNA上的特定序列进行定点切割和重新连接，从而在基因或染色体水平上对生物基因进行遗传改造的一种技术。其原理是重组酶Cre能识别loxP位点（特定的DNA序列），并使loxP位点间的基因序列被重组或删除。受此启发，科学家在检测抗虫基因成功导入烟草细胞后，尝试用Cre/loxP重组酶系统删除转基因烟草细胞内的抗除草剂基因，其技术过程如图2（其中■表示启动子）。

（1）通过基因改造获得抗虫烟草过程中，为大量获得抗虫基因，可选择图1中引物

II、III

II、III

（用图中罗马数字表示）组合进行PCR扩增；扩增时，为确保抗虫基因和表达载体充分连接，常在基因上、下游引物的

5'

5'

端添加不同的限制酶切位点，其目的是

减少DNA自连，使抗虫基因能定向插入表达载体

减少DNA自连，使抗虫基因能定向插入表达载体

。
（2）loxP是一种含34个碱基对的小型DNA片段，由一个不对称的间隔区和两个反向重复序列组成。Cre酶能特异性地识别反向重复序列并于特定位置切开磷酸二酯键，类似于基因工程中的

限制

限制

酶，从遗传学角度分析，Cre酶改变质粒的原理是

基因重组

基因重组

。
（3）通常用

农杆菌转化

农杆菌转化

法把携带抗虫基因的重组质粒甲导入烟草细胞，经检测导入成功后，抗除草剂基因即失去用途，继续留在烟草体内可能会引发的生物环境安全问题是

抗除草剂基因可能转移到杂草中，造成基因污染

抗除草剂基因可能转移到杂草中，造成基因污染

。
（4）经Cre酶处理后，质粒中的两个loxP序列分别被切开，得到图2右侧的两个环状DNA分子。由于

质粒乙的抗除草剂基因前没有启动子

质粒乙的抗除草剂基因前没有启动子

，抗除草剂基因不再表达，之后会在培养过程中消失。