人乳铁蛋白（hLF）广泛分布于乳汁等外分泌液，初乳中含量较高，对细菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人员开展人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建及转染研究，主要流程如图，图中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相关限制酶切点，neor为新霉素抗性基因，BLG基因为β乳球蛋白基因，GFP基因为绿色荧光蛋白基因。请回答：

（1）过程①方法的基本原理是先以人乳腺细胞总RNA为模板通过逆转录合成cDNA（互补DNA），再通过PCR技术扩增相应的DNA片段——hLF基因。但是过程①中，不能从人肌肉细胞中提取RNA用于RT-PCR，这是因为

hLF基因在人肌肉细胞中不转录

hLF基因在人肌肉细胞中不转录

，在RT-PCR过程中，加入的引物需在

5'

5'

端添加识别序列的限制酶是

SalⅠ和BamHⅠ

SalⅠ和BamHⅠ

，以便于hLF基因插入pEB质粒中。
（2）过程②中，hLF基因插入到BLG基因之后，利用后者的启动子的目的是

使人乳铁蛋白基因在山羊的乳腺细胞中表达

使人乳铁蛋白基因在山羊的乳腺细胞中表达

。
（3）将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新霉素的培养液中培养，能够存活的细胞应该是导入了

pEB质粒或pEBL质粒

pEB质粒或pEBL质粒

的细胞，再利用荧光显微镜观察山羊乳腺上皮细胞是否有

绿色荧光

绿色荧光

以筛选出转染成功的细胞。
（4）科研过程中，可以用PCR技术检测受体细胞中的染色体上DNA上是否

插入了hLF基因

插入了hLF基因

或检测

hLF基因是否转录出mRNA

hLF基因是否转录出mRNA

。可以用

抗原—抗体杂交

抗原—抗体杂交

技术，检测hLF基因是否翻译成人乳铁蛋白。