启动子可分为组成型启动子和诱导型启动子。35S启动子是组成型启动子，能够持续、高效地启动目的基因在植物各种组织中表达，但往往也会阻碍植物的生长发育；Rd29A启动子是一种逆境诱导型启动子。沙冬青脱水素基因（AmDHN基因）能使植株具有较强的抗旱作用。科研人员构建Rd29A启动子驱动AmDHN基因表达的载体，过程如图1，再利用农杆菌转化法转化“敖汉苜蓿”培育耐旱新品种，以期在干旱地区发展苜蓿产业。请回答下列问题：
注：neor是新霉素抗性基因，aadA是链霉素抗性基因。
（1）Rd29A启动子的基本组成单位是脱氧核苷酸脱氧核苷酸；能识别启动子的酶是RNA聚合酶RNA聚合酶。
（2）科研人员扩增Rd29A启动子所设计的引物如下，根据引物的碱基序列及限制酶的识别序列分析，构建载体2时选用的限制酶是SmaⅠ和SacⅠSmaⅠ和SacⅠ。
上游引物P1：5'-GACCCGGGTTTCCAAAGATTTTTTTC-3'
下游引物P2：5'-GAGAGCTCTGGGGTTTTGCTTTTGAATGT-3'
（3）选用BclⅠ、SacⅠBclⅠ、SacⅠ酶切割载体1、2，构建载体3的成功率较高。研究人员在保存目的基因AmDHN时，构建载体4导入大肠杆菌的优点有①②④①②④。
①稳定保存
②准确复制
③快速表达
④方便取用
（4）载体5需先转入农杆菌农杆菌后再转化苜蓿，转化后应在培养基中添加新霉素新霉素筛选转化成功的愈伤组织。
（5）为检测转基因苜蓿中AmDHN基因的转录水平，挑选10株转基因植株，利用自来水和20%PEG（模拟干旱条件）处理8h,提取RNA通过RT-PCR检测AmDHN基因和MtActin基因（一种骨架蛋白基因）的表达水平，其结果如图2：
①选择MtActin基因转录水平作为参照的依据是MtActin基因在各种细胞中表达相对恒定。
②自来水处理和20%PEG条件下的AmDHN基因表达水平的差异说明干旱能诱导Rd29A启动子启动转录干旱能诱导Rd29A启动子启动转录。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】脱氧核苷酸；RNA聚合酶；SmaⅠ和SacⅠ；BclⅠ、SacⅠ；①②④；农杆菌；新霉素；干旱能诱导Rd29A启动子启动转录
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：21引用：1难度：0.6
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（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
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