塑料制品方便人们生活的同时，也造成了短时期难以降解的“白色污染“。研究人员欲比较大肠杆菌YT1和芽孢杆菌YP1两类细菌降解塑料（主要成分为聚氯乙烯（PVC）、聚乙烯（PE）和聚丙烯（PP）等，两类细菌主要降解PE）的能力，并通过基因工程拼接黄粉虫肠道内菌株WZ的降解PVC的胞外酶基因A，培育降解塑料的“超级菌”。
（1）菌株的筛选。配制固体培养基，接种菌株后表层覆盖0.1mm厚度的PE塑料。分组实验结果如图所示：
| 培养基及接种菌株 | 培养基1 | 培养基2 | 培养基3 |
| 单独培养并接种YT1 | 单独培养并接种YP1 | 混合培养YT1和YP1后，选取YP1接种 | |
| 降解圈（直径D/mm） | 3.5 | 1.8 | 4.2 |
PE塑料
PE塑料
为唯一碳源的培养基，从功能上讲，该培养基属于 选择培养基
选择培养基
。②筛选分解PE塑料能力强的菌株不能直接以降解圈的大小为指标，其原因是
因为菌体繁殖力不同，形成的菌落大小不同
因为菌体繁殖力不同，形成的菌落大小不同
。培养基3中接种混合培养后的YP1，其降解圈直径明显加大，其原因可能是 YP1和YT1混合培养过程中，YP1菌株整合了YT1的对PE塑料高分解力的基因，发生了转化
YP1和YT1混合培养过程中，YP1菌株整合了YT1的对PE塑料高分解力的基因，发生了转化
。（2）培育“超级菌”。对菌株WZ的A基因测序可知，如果在其调节功能区增加一个碱基对A/T，则可以大大增强其基因表达能力。通过经典的大引物PCR定点诱变技术在体外改造A基因，操作过程如图1。然后与图2所示的质粒构建表达载体，培育“超级菌“。
①利用大引物PCR进行定点诱变需要进行两轮PCR（PCR和PCRa），在PCR，中获得的大引物是指
以诱变引物延伸得到的DNA链为模板，引物1与之结合延伸得到的DNA子链
以诱变引物延伸得到的DNA链为模板，引物1与之结合延伸得到的DNA子链
，至少需要 4
4
个PCR循环才能获得完整的改良A基因。②构建改良基因表达载体时，为实现质粒和改良基因的准确连接，应选用的限制酶是
XmaⅠ和BglⅡ
XmaⅠ和BglⅡ
。表达载体导入受体菌株时，有的质粒含有改良的A基因，有的质粒为空白质粒。在含氨苄青霉素和β-半乳糖苷的平板上培养一段时间后，其中白色菌落含有重组质粒，判断的依据是 含有改良基因A的重组质粒不含有完整的LacZ基因，受体菌不能分泌分解β-半乳糖苷而使培养基变蓝的酶
含有改良基因A的重组质粒不含有完整的LacZ基因，受体菌不能分泌分解β-半乳糖苷而使培养基变蓝的酶
。【答案】PE塑料；选择培养基；因为菌体繁殖力不同，形成的菌落大小不同；YP1和YT1混合培养过程中，YP1菌株整合了YT1的对PE塑料高分解力的基因，发生了转化；以诱变引物延伸得到的DNA链为模板，引物1与之结合延伸得到的DNA子链；4；XmaⅠ和BglⅡ；含有改良基因A的重组质粒不含有完整的LacZ基因，受体菌不能分泌分解β-半乳糖苷而使培养基变蓝的酶
【解答】
【点评】
声明：本试题解析著作权属菁优网所有，未经书面同意，不得复制发布。
发布：2024/6/27 10:35:59组卷：25引用：1难度：0.5
相似题
-
1．丙草胺（C15H22ClNO2）是一种广泛应用的除草剂，能抑制土壤细菌、放线菌和真菌的生长。某研究小组从某地土壤中分离获得能有效降解丙草胺的细菌菌株，并对其计数（如图所示），以期为修复污染土壤提供微生物资源。下列叙述错误的是（ ）
发布：2024/12/31 4:0:1组卷：17引用：3难度：0.7 -
2．回答下列关于微生物的问题．
阿拉伯胶是一种多糖，研究者从某地合欢树下距离地表深10～15cm处的土样中初筛到能合成阿拉伯胶降解酶的菌株SM01，以下为该菌株的鉴定过程．
（1）为获得单菌落，可采用平板划线法或法将初筛菌液接种在培养基上．46SM01菌落为粉白色，初期呈突起絮状，在显微镜下观察到，菌丝白色致密，且有分生孢子，细胞核直径约1μm,初步推测为真菌，则其特征中，最能说明SM01是真菌的是有细胞核，且有分生孢子．SM01还一定具有的结构有（多选）．
A．细胞膜 B．核糖体 C．拟核 D．荚膜
（2）表中培养液pH均为6.0，若对SM01中阿拉伯胶降解酶的活力进行测定，则应选用表中的培养液，针对不选用的其他培养液，分别说明原因：
①缺少，SM01不能很好生长
②具有，会影响对SM01自身产生的酶活力的测定结果
③缺乏，会影响SM01的生长，也无法对阿拉伯胶酶活力进行测定．
表 试验用培养液配方培养液 阿拉伯胶 阿拉伯胶酶 NaNO3 牛肉膏 K2SOPO4 MgSO4•7H2O KCl FeSO4•7H2O
A
25g/L__ __ __
g/L
g/L
g/Lg/L B
25g/L
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L
g/LC __ __
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/LD
25g/L__
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L发布：2025/1/2 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.5 -
3．为了防治大气污染，烟气脱硫是环保领域迫切需要解决的问题．研究人员为了获得用于烟气脱硫的脱硫细菌，并了解其生长规律，进行了如下操作．请回答下列问题：
（1）采样与细菌的筛选：在某热电厂烟囱周围区域要尽量做到采集土样．为确保能够从样品中分离到所需要的烟气脱硫细菌，可以通过增加脱硫菌的浓度．
（2）驯化脱硫细菌：将筛选出的脱硫细菌接种于有少量无菌水的三角瓶中，边搅拌边持续通入SO2气体几分钟，然后接种到培养基上，待长出菌落后再重复上述步骤，并逐步延长通SO2的时间，同时逐步降低培养基的pH．此操作的目的是分离出的脱硫细菌．
（3）培养与观察：一般来说，在一定的培养条件下（相同的培养基、温度及培养时间），驯化后的脱硫细菌表现出稳定的特征．用高倍显微镜（填“可以”或“不可以”）观察到脱硫细菌的核糖体．
（4）探究生长规律：在计数时，计数方法有稀释涂布平板法和直接计数法．在用稀释涂布平板法进行计数时，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的；通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌，通常推测统计的菌落数往往比活菌的实际数目．发布：2025/1/1 8:0:2组卷：6引用：2难度：0.5
相关试卷
