普通酵母菌利用淀粉的效率较低。研究人员将某海洋细菌中α-淀粉酶分子（B）基因转入酵母菌中，经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种。请回答下列问题：
（1）采用PCR技术扩增B基因。图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，请用箭头在方框内标出另一条引物的位置及扩增方向。为使PCR产物能被限制酶切割，需在引物上添加相应的限制酶识别序列，该限制酶识别序列应添加在引物的

5'端

5'端

（3′端/5′端）。
（2）通常需提取大肠杆菌的质粒用来构建B基因的表达载体。提取的主要步骤是培养大肠杆菌→裂解菌体→质粒DNA的复性→离心提取→鉴定。在裂解菌体时需添加溶液（主要成分为EDTA）、溶液Ⅰ（主要成分为SDS），添加顺序是先加

溶液Ⅰ

溶液Ⅰ

，5min后再加

溶液Ⅱ

溶液Ⅱ

。在所提取的质粒上还需添加

酵母菌

酵母菌

（海洋细菌/大肠杆菌/酵母菌）的启动子、终止子等。
（3）在将B基因导入酵母细胞前，需先将酵母菌置于含醋酸锂的培养液中培养一段时间，从而提高转化效率。由此推测，醋酸锂的培养液可用于制备

感受态酵母菌

感受态酵母菌

。
（4）用B抗体检测该工程菌的培养物时，培养液无抗原抗体反应，菌体有抗原抗体反应。这为分离、纯化B蛋白提供的启示是

在用该工程菌进行工业发酵时，应从菌体中分离、纯化B蛋白

在用该工程菌进行工业发酵时，应从菌体中分离、纯化B蛋白

。以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种了工程酵母菌的发酵罐需要率先排气，其原因是

工程酵母菌分解淀粉产生葡萄糖的能力强，导致酒精发酵产生CO₂速率更快

工程酵母菌分解淀粉产生葡萄糖的能力强，导致酒精发酵产生CO₂速率更快

。
（5）如果将B的丝氨酸变成亮氨酸，改变后的α-淀粉酶分子（B）不但保留B的功能，而且具更高的催化活性。以B基因序列为基础，获得B₁基因的途径有修饰

B

B

基因或合成

B₁

B₁

基因。