随着石油危机的出现，乙醇作为可再生资源中比较理想的液态燃料正受到人们越来越多的关注。自然界中可再生的木质纤维素资源极为丰富，其主要成分之一是半纤维素。半纤维素容易被酸或者酶水解，其水解产物中的85%～90%为木糖。因此利用木糖发酵生产乙醇具有重要的应用研究价值。酵母菌是传统的乙醇生产菌株，因其缺乏转化木糖的酶系而不能很好地利用木糖。自然界中某些酿酒酵母能利用木糖进行酒精发酵，某研究小组欲从土壤中分离这种酵母菌并对产酶活性进行测定，实验基本流程为：
取土样→制取土壤悬液→扩大培养→选择培养→菌种分离→酶活性鉴定
请回答下列问题：
（1）扩大培养又称富集培养，可增加

目的菌株数量

目的菌株数量

，以确保能够从样品中分离得到所需要的微生物。
（2）分离纯化微生物的关键是

逐渐将聚集的菌体分散，以得到由单个细胞增殖而形成的单个菌落

逐渐将聚集的菌体分散，以得到由单个细胞增殖而形成的单个菌落

。该研究小组将扩大培养后的混合菌液适当稀释后接种于

以木糖为唯一碳源

以木糖为唯一碳源

的选择培养基，倒置放入培养箱培养。常用的接种方法有

平板划线法和稀释涂布平板法

平板划线法和稀释涂布平板法

两种。若划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。第二划线区域的第一条线上无菌落的原因是

接种环灼烧灭菌后未冷却即进行划线操作、未从上次划线末端开划线

接种环灼烧灭菌后未冷却即进行划线操作、未从上次划线末端开划线

。
（3）为进一步确定目的菌株的最佳产酶条件，该研究小组选取培养基初始pH、培养温度、摇床转速以及装液量4个因素实验。其中，培养基初始pH、培养温度会影响菌株产酶主要是因为

培养基初始pH、培养温度会影响酶活性

培养基初始pH、培养温度会影响酶活性

；摇床转速因影响

溶氧量、菌种获取营养物质的几率

溶氧量、菌种获取营养物质的几率

进而影响菌株产酶。