蔗糖是植物光合作用中最先形成的游离糖，蔗糖转运蛋白在蔗糖的跨膜转运等过程中起重要作用。目前，在拟南芥中已经鉴定出9个蔗糖转运蛋白基因。以AtSUC3、AtSUC5纯合单突变体为亲本，采用传统杂交法并结合PCR技术获得AtSUC3和AtSUC5纯合双突体。
（1）科研人员构建含已知序列T-DNA片段的

重组DNA分子（重组质粒、重组载体）

重组DNA分子（重组质粒、重组载体）

，转化野生型拟南芥，导致被插入基因发生

基因突变

基因突变

，筛选和自交得到了2种纯合突体AtSUC3和AtSUC5。
（2）为研究AtSUC3和AtSUC5基因的传递规律，上述2种纯合突变体杂交得F₁，F₁自交获得F₂．依据AtSUC3、AtSUC5、T-DNA片段（完整的T-DNA过大，不能完成PCR）序列设计引物分别为Ⅰ～Ⅶ（如图所示）。

①PCR1利用引物

Ⅰ、Ⅳ

Ⅰ、Ⅳ

（填写引物代号）可克隆AtSUC5，标记为A；PCR2利用引物

Ⅰ、Ⅴ

Ⅰ、Ⅴ

（填写引物代号）可克隆被T-DNA插入的AtSUC5，标记为a；PCR3克隆AtSUC3，标记为B；PCR4克隆被T-DNA插入的AtSUC3，标记为b。
②部分F₂植株的PCR情况见表

基因型	i	ii	iii	iv	v
PCR1	+	-	+	？	…
PCR2	+	+	-	？	…
PCR3	+	+	-	？	…
PCR4	+	-	+	？	…
“+”有PCR产物“-”无PCR产物

表中i植株的基因型为

AaBb

AaBb

（用A、a、B、b表示）。若表中iv植株为AtSUC3/AtSUC5双突变纯合子，其对应的PCR1～PCR4结果依次为

-+-+

-+-+

（用“+”或“-”表示）。若AtSUC3/AtSUC5双突变纯合子在F₂所占比例为n²（n²远远小于

1

16

），则亲本型配子的比例为

1-2n

1-2n

，说明AtSUC3与AtSUC5的位置关系为

位于（一对）同源染色体上

位于（一对）同源染色体上

。
（3）拟南芥的果实为角果，成熟后可自然开裂传播种子。进一步研究发现，AtSUC3纯合突变体的角果开裂率较野生型明显降低，AtSUC3/AtSUC5双突变纯合子角果开裂率介于两者之间，说明AtSUC3、AtSUC5基因功能关系为

拮抗

拮抗

（选择填写“协同”或“拮抗”），共同控制拟南芥种子的传播。