VNN1基因（1542bp）与炎症相关性疾病有关，GFP基因（4735bp）控制绿色荧光蛋白的合成，该蛋白可在相应波长的紫外光激发下发出绿色荧光。某研究小组进行鼠源GFP-VNN1重组质粒的构建及其功能研究，回答下列问题：
（1）为构建重组质粒，研究小组从数据库查找到VNNl的DNA序列，并设计引物。上游引物：5'-AAGCTTCCGCTGCACCATGACTACTC-3'（下划线为HindⅢ酶切位点），下游引物：5'-GGATCCGCTCGAGCTACCAACTTAATGA-3'（下划线为BamH I酶切位点），之后进行PCR扩增，PCR的原理是 DNA双链复制DNA双链复制。扩增后的VNN1基因要与含GFP基因的载体连接，需用 HindⅢ酶和BamHⅠ酶HindⅢ酶和BamHⅠ酶（填具体酶）切割VNN1基因和含GFP基因的载体，再用 DNA连接酶DNA连接酶 酶处理，构建重组质粒。
（2）GFP基因在重组质粒中可作为 标记基因标记基因，其作用是 鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含目的基因的细胞筛选出来鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含目的基因的细胞筛选出来。用之前相同的限制酶对GFP-VNN1重组质粒切割后，进行电泳鉴定时得到如图1所示的部分条带，结果表明 VNN1基因已经插入到含GFP基因的载体中VNN1基因已经插入到含GFP基因的载体中。
（3）IL-6为体内重要的炎症因子，能与相应的受体结合，激活炎症反应。图2为GFP-VNN1重组质粒对细胞分泌IL-6的影响，由此说明 VNN1基因表达产物能促进细胞分泌炎症因子IL-6VNN1基因表达产物能促进细胞分泌炎症因子IL-6，同时发现与正常组比较，空质粒转染组IL-6的表达有轻微升高，造成这种现象的可能原因是 操作过程中对细胞的损伤（或用到化学试剂对细胞具有一定的毒性作用），可以激活相应细胞分泌炎症因子IL-6操作过程中对细胞的损伤（或用到化学试剂对细胞具有一定的毒性作用），可以激活相应细胞分泌炎症因子IL-6。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】DNA双链复制；HindⅢ酶和BamHⅠ酶；DNA连接酶；标记基因；鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含目的基因的细胞筛选出来；VNN1基因已经插入到含GFP基因的载体中；VNN1基因表达产物能促进细胞分泌炎症因子IL-6；操作过程中对细胞的损伤（或用到化学试剂对细胞具有一定的毒性作用），可以激活相应细胞分泌炎症因子IL-6
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：17引用：2难度：0.7
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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