利用新冠病毒（SARS-CoV-2）包膜表面的S蛋白研发的疫苗已在我国广泛接种。如图表示制备疫苗的相关过程，其中m、n分别是启动子和终止子，箭头处是限制酶的切点，SUC2是酵母菌的蔗糖转化酶基因，其终产物存在于液泡中，可以催化蔗糖水解成单糖被细胞利用。下表是可供选择使用的限制酶及其识别序列和切割位点。

限制酶	BamHⅠ	NheⅠ	NcoⅠ	SphⅠ	Sau3AⅠ
识别序列和切割位点	5′-G↓CTAGC-3′	5′-G↓GATCC-3′	5′-C↓CATGG-3′	5′-GCATG↓C-3′	5′-↓GATC-3′

（1）上图②过程所使用的两种酶是

NheI、NcoI

NheI、NcoI

，选择两种酶切割的优点是

形成不同的黏性末端，防止质粒及目的基因自连及目的基因反接

形成不同的黏性末端，防止质粒及目的基因自连及目的基因反接

。
（2）由上图推测，目的基因S表达的模板链是a链，理由是

目的基因的a链位于重组质粒的内侧，b链位于外侧，转录方向为m→n,且转录只能从模板链的为3'端开始，因此a链是模板链

目的基因的a链位于重组质粒的内侧，b链位于外侧，转录方向为m→n,且转录只能从模板链的为3'端开始，因此a链是模板链

；该目的基因的表达离不开m,原因是

基因表达包括转录和翻译，启动子m是RNA聚合酶识别和结合部位，有了它才能驱动基因的转录

基因表达包括转录和翻译，启动子m是RNA聚合酶识别和结合部位，有了它才能驱动基因的转录

。
（3）RT-PCR是将RNA逆转录（RT）和聚合酶链式反应（PCR）相结合的技术。利用S蛋白的RNA作为模板进行过程①，首先需要加入缓冲液、原料、酶Ⅰ、引物Ⅰ等物质后进行RT，获得单链DNA后，还需要添加与单链DNA互补的引物Ⅱ及酶Ⅱ，在PCR过程中酶Ⅰ所处的状态是

失活

失活

。以一个单链DNA为起点，进行n次循环的扩增，理论上需要

2^n-1

2^n-1

个引物Ⅱ；PCR每次循环一般可以分为变性、

复性

复性

、延伸三步。
（4）SUC2作为B上的标记基因，可以对导入B的酵母菌进行筛选。筛选时，需要使用以蔗糖为唯一碳源的培养基，对受体突变型酵母菌的要求是

不含SUC2基因或者SUC2基因被敲除

不含SUC2基因或者SUC2基因被敲除

。
（5）与普通灭活或减活疫苗相比，上述方法制备的疫苗对人体更安全，主要原因是

此疫苗不含新冠病毒的核酸，不会在人体内增殖，仅注射病毒的部分蛋白进入人体，更安全

此疫苗不含新冠病毒的核酸，不会在人体内增殖，仅注射病毒的部分蛋白进入人体，更安全

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