新冠病毒处于不断的变异中，为了增强疫苗接种的有效性，科研人员拟将新冠病毒的S、N及E蛋白的主要抗原信息片段串联成融合蛋白作为疫苗的有效成分，如图为其研发思路。图中①-⑤表示过程，表中为四种限制酶的识别序列。
| 限制酶 | NcoⅠ | SphⅠ | BamHⅠ | NheⅠ |
| 识别序列和切割位点 | C↓CATGG | GCATG↓C | G↓CTAGC | G↓GATCC |
cDNA
cDNA
序列，利用化学合成的方法得到目的基因，即融合基因，再使用 PCR
PCR
技术扩增该基因。（2）图中①过程为
构建基因表达载体
构建基因表达载体
，需先使用限制酶 NcoⅠ和NheⅠ
NcoⅠ和NheⅠ
切割质粒pET-28a,相较于用同一种限制酶切，用两种限制酶切的优点是 防止目的基因自身环化，防止目的基因与质粒反向连接
防止目的基因自身环化，防止目的基因与质粒反向连接
。（3）步骤②中用Ca2+处理大肠杆菌，然后将转化后的菌液涂布于含
氨苄青霉素
氨苄青霉素
的培养基上，该培养基长出的菌落 是
是
（选填“是”或“不是”或“不一定是”）导入了重组质粒的大肠杆菌。（4）可利用
抗原抗体杂交
抗原抗体杂交
法检测该融合蛋白基因是否转录。（5）利用大肠杆菌表达融合蛋白，可实现大规模、高产量制备，但缺点是需要对获得的蛋白质进行体外加工，从细胞结构和功能角度分析，原因是大肠杆菌
是原核生物，无细胞器对蛋白质进行加工
是原核生物，无细胞器对蛋白质进行加工
。【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】cDNA；PCR；构建基因表达载体；NcoⅠ和NheⅠ；防止目的基因自身环化，防止目的基因与质粒反向连接；氨苄青霉素；是；抗原抗体杂交；是原核生物，无细胞器对蛋白质进行加工
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：6引用：1难度：0.5
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
