基因工程重组亚单位疫苗是预防新冠病毒感染和传播的一种有效方案，其原理是把新冠病毒上负责“生产”S蛋白的那部分基因找到，构建体外重组表达载体，导入到微生物体内，“生产”出需要的S蛋白制成疫苗。下图是在体外构建病毒S蛋白重组表达载体的实验流程及相关限制酶的酶切位点。回答下列问题：
| 限制酶 | BamHI | BclI | Sau3AI | HindIII |
| 识别序列及切割位点 |
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（1）从患者肺部组织中分离并提取得到病毒RNA，通过
逆转录
逆转录
获得S蛋白的cDNA，再通过 PCR
PCR
法对S蛋白的基因进行扩增，扩增的一般步骤是 变性→复性→延伸
变性→复性→延伸
。（2）用图1中的质粒X和图2中的S蛋白基因构建重组质粒，应选用
BclⅠ和HindⅢ
BclⅠ和HindⅢ
两种限制酶切割，切割后通过 DNA连接
DNA连接
酶作用获得重组质粒。（3）转化前，用含
Ca2+（CaCl2）
Ca2+（CaCl2）
的溶液处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞。转化后，将大肠杆菌置于含 四环素
四环素
的培养基中培养，方便筛选出含重组质粒的大肠杆菌。为进一步鉴定筛选出的大肠杆菌是否导入S蛋白基因，可用引物 甲、丙
甲、丙
进行扩增验证。【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】逆转录；PCR；变性→复性→延伸；BclⅠ和HindⅢ；DNA连接；Ca2+（CaCl2）；四环素；甲、丙
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：1引用：2难度：0.7
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发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
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（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
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（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
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