人呼吸道合胞病毒（HRSV）是一种单链RNA病毒，如图是构建人呼吸道合胞病毒基因组载体的示意图，下表是相关限制酶的识别序列及切割位点，请回答：

限制酶	BclⅠ	EcoRⅠ	XbaⅠ	Sau3AⅠ	BamHⅠ
识别序列及切割位点	T↓GATCA	G↓AATTC	T↓CTAOA	↓GATC	G↓GATCC

（1）HRSV的基因组为-RNA，入侵细胞后在

RNA复制酶

RNA复制酶

的催化下合成+RNA．
（2）过程②设计引物时在两种引物的5′端分别添加

XbaⅠ

XbaⅠ

、

Sau3AⅠ

Sau3AⅠ

酶的识别序列。过程③需要用

XbaⅠ

XbaⅠ

、

Sau3AⅠ

Sau3AⅠ

酶切割质粒A。
（3）过程④将质粒B导入大肠杆菌，有利于

扩增重组DNA分子，用于下一步的抗性检测

扩增重组DNA分子，用于下一步的抗性检测

，需要用

Ca²⁺

Ca²⁺

处理大肠杆菌。
（4）为制备减毒突变株，科研人员将单个突变碱基引入HRSV基因组cDNA质粒克隆中，流程如图。已知在细菌体内合成的DNA分子有甲基化修饰，通过PCR扩增的DNA链无甲基化修饰。

①DpnⅠ识别甲基化的GATC四个碱基序列，因此其能将

原来的a、b链

原来的a、b链

水解消化掉。在大肠杆菌细胞内完成缺刻修复需要

DNA连接

DNA连接

酶。
②已知质粒B为a个，经过程①扩增15个循环，需要突变引物

15a

15a

个，将过程②形成的产物全部转入大肠杆菌后复制n轮，得到双链突变的DNA

15a×2^n-1

15a×2^n-1

个。