结核病是由结核杆菌引起的人畜共患病。结核杆菌通常以气溶胶形式传播，气溶胶颗粒被肺泡吞噬细胞吞噬，吞噬细胞破裂导致结核杆菌在机体内进一步传播。羊痒病是由正常细胞的非致病性朊蛋白异构化为痒病朊蛋白所致。为研制既能抗结核病又能抗羊痒病的双抗羊，科学家进行了如图操作。
（1）小鼠SP110基因是目前发现的具有抗结核杆菌感染功能的基因。为了验证SP110基因的功能，同时也为了验证山羊吞噬细胞特异性启动子MSR可以启动SP110基因在吞噬细胞内的表达，设计以下三组实验。实验组将MRS启动子与小鼠SP110基因形成融合基因，用 限制酶和DNA连接酶限制酶和DNA连接酶将融合基因与质粒构建成重组质粒，导入山羊肺泡吞噬细胞（组2）。以 转入广泛表达小鼠SP110基因的重组质粒的山羊吞噬细胞转入广泛表达小鼠SP110基因的重组质粒的山羊吞噬细胞（组3）和转入空质粒的山羊吞噬细胞为对照组（组1）。分别接种等量的结核杆菌，72h后加入 蒸馏水蒸馏水使吞噬细胞破裂，取裂解液进行涂布培养，结果如图1。由图可知小鼠SP110基因可用于双抗羊的研制，依据是 组2的吞噬细胞裂解后释放的结核杆菌数量与组3接近，显著小于组1组2的吞噬细胞裂解后释放的结核杆菌数量与组3接近，显著小于组1。
（2）非致病性朊蛋白是由山羊13号染色体上的PRNP基因的第三外显子控制合成的，PRNP基因的结构如图2。以L4和R1为识别位点设计TALEN敲除载体，对山羊成纤维细胞L4与R1之间的序列实施定点敲除。然后，将TALEN敲除载体与供体DNA载体共转化幼羊成纤维细胞，可将SP110基因定点敲入PRNP基因的第三外显子中，原理如图3。请指出图4中的数字分别代表的结构。1 L4序列L4序列，2 MRS启动子MRS启动子，3 终止子终止子，4 R1序列R1序列。经 抗原抗体杂交技术抗原抗体杂交技术检测，山羊成纤维细胞中非致病性朊蛋白基因和SP110基因的表达情况是 均降低（不表达）均降低（不表达）。
（3）欲用上述细胞获得双抗羊，需要用到的技术有 体细胞核移植、动物细胞培养（早期胚胎培养）、胚胎移植体细胞核移植、动物细胞培养（早期胚胎培养）、胚胎移植（至少写出三项）。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】限制酶和DNA连接酶；转入广泛表达小鼠SP110基因的重组质粒的山羊吞噬细胞；蒸馏水；组2的吞噬细胞裂解后释放的结核杆菌数量与组3接近，显著小于组1；L4序列；MRS启动子；终止子；R1序列；抗原抗体杂交技术；均降低（不表达）；体细胞核移植、动物细胞培养（早期胚胎培养）、胚胎移植
【解答】
【点评】
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发布：2024/8/2 8:0:9组卷：17引用：3难度：0.6
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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