图示PIJ702是一种常用质粒，其中tar为硫链丝菌素（一种抗生素）抗性基因；mel为黑色素合成基因，其表达能使白色的链霉菌菌落变成黑色菌落；而三种限制酶SacⅠ、SphⅠ、BglⅡ在pIJ702上分别只有一处识别序列。回答下列问题。
表1
| pU702pZHZ8 |
| BglI5.7kb6.7kb |
| 固体培养基中硫链丝菌素浓度（ug/mL） | 0 | 1 | 2 | 5 | 10 |
| 不含质粒的链霉菌生长状况 | +++++ | +++ | + | - | - |
（1）限制性核酸内切酶可以识别双链DNA中特定核苷酸序列，并使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的
磷酸二酯键
磷酸二酯键
断裂，切割形成的末端有 黏性末端和平末端
黏性末端和平末端
两种。（2）以SacⅠ和SphⅠ切取目的基因，与质粒pIJ702上长度为0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段进行置换，构建重组质粒pZHZ8。上述两种质粒经限制酶BglⅡ酶切后所得片段长度见表1。由此判断目的基因的片段长度为
1.4
1.4
kb,判定目的基因中含有一个BglⅡ切割位点的理由是 pIJ702上的原有BglII位点被目的基因置换得到的环状pZHZ8，仍能被BglII切割成一条线段
pIJ702上的原有BglII位点被目的基因置换得到的环状pZHZ8，仍能被BglII切割成一条线段
。（3）导入目的基因时，首先用Ca2+处理链霉菌使其成为感受态细胞，再将重组质粒pZHZ8溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下可以促进链霉菌完成
转化
转化
过程。（4）不含质粒的链霉菌在含硫链丝菌素的固体培养基上生长状况如表2所示。若要筛选导入pZHZ8的链霉菌细胞，所需硫链丝菌素浓度至少应在
5
5
μg/mL以上，挑选成功导入pZHZ8的链霉菌的具体方法是 根据导入plJ702的链霉菌菌落呈黑色、导入pZHZ8的链霉菌菌落呈白色的特点，通过观察菌落的颜色进行挑选
根据导入plJ702的链霉菌菌落呈黑色、导入pZHZ8的链霉菌菌落呈白色的特点，通过观察菌落的颜色进行挑选
。若要检测整合到染色体DNA上的目的基因是否发挥功能作用，第一步需检测受体细胞的 RNA
RNA
（填“DNA”或“RNA”），检测方法应采用 分子杂交
分子杂交
技术。【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】磷酸二酯键；黏性末端和平末端；1.4；pIJ702上的原有BglII位点被目的基因置换得到的环状pZHZ8，仍能被BglII切割成一条线段；转化；5；根据导入plJ702的链霉菌菌落呈黑色、导入pZHZ8的链霉菌菌落呈白色的特点，通过观察菌落的颜色进行挑选；RNA；分子杂交
【解答】
【点评】
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发布：2024/11/5 22:30:2组卷：22引用：3难度：0.6
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