突尼斯软籽石榴是一种热门水果，深受大家喜爱，但其抗寒能力差，这成为限制该种石榴栽培的重要因素。科学家们利用基因工程对其进行定向改造，以得到抗寒性强的优良品种。如图表示构建基因表达载体的方法，图中标注的是限制酶的酶切位点，请回答下列问题：
（1）在切割目的基因时选择的两种限制酶最好为SmaI和PstISmaI和PstI，选择两种限制酶的优势是可避免质粒自身成环和质粒与目的基因的反向连接质粒自身成环和质粒与目的基因的反向连接。
（2）可通过PCRPCR技术对获得的抗寒基因进行体外扩增，该过程使DNA解旋的方法与细胞内复制时的差异是体外扩增目的基因利用加热至90～95℃的高温使DNA解旋，细胞内复制目的基因使用解旋酶使DNA解旋体外扩增目的基因利用加热至90～95℃的高温使DNA解旋，细胞内复制目的基因使用解旋酶使DNA解旋，体外扩增时使用的酶具有的显著特点是耐高温（或具有热稳定性）耐高温（或具有热稳定性）。
（3）将重组质粒导入经脱分化脱分化（过程）培养成的软籽石榴的愈伤组织中常用农杆菌转化农杆菌转化法。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】SmaI和PstI；质粒自身成环和质粒与目的基因的反向连接；PCR；体外扩增目的基因利用加热至90～95℃的高温使DNA解旋，细胞内复制目的基因使用解旋酶使DNA解旋；耐高温（或具有热稳定性）；脱分化；农杆菌转化
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：23引用：3难度：0.6
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7
