从自然界中的生物体内分离得到的天然酶，在工业生产环境中催化效率往往较低。科研人员对酶的改造包括理性设计方法和非理性设计方法。
（1）理性设计是通过定点诱变改变蛋白质中的个别氨基酸，以产生更加理想的酶，此项技术称为 蛋白质工程蛋白质工程。
（2）非理性设计方法主要通过易错PCR技术实现。易错PCR的原理是利用低保真的TaqDNA聚合酶和改变PCR的反应条件，降低DNA复制的保真度，在新DNA链的合成过程中增加碱基错配，从而使扩增产物出现较多点突变的一种体外诱导DNA序列变异的方法。
①TaqDNA聚合酶与一般DNA聚合酶相比最大的特点是 高温下能保持活性或耐高温高温下能保持活性或耐高温，其某一区域负责将碱基与模板链正确地互补配对，Mn2+可以降低这一功能，提高碱基的错配，但非互补的碱基对由于 氢键氢键不易形成，稳定性差，而Mg2+可以提高稳定性，易错PCR时应适当 提高提高（填“提高”或“降低”）Mg2+浓度。
②易错PCR的反应程序为：95℃5min；95℃30s,55℃30s,72℃1min,30个循环；72℃10min。在循环之前的95℃5min处理为预变性，目的是确保 DNA分子充分（完全、彻底）变性DNA分子充分（完全、彻底）变性；循环中55℃处理的目的是使 引物与模板引物与模板结合；循环之后72℃处理时间延长至10min,有利于增加延伸过程中碱基错配的概率。
③如图是利用易错PCR改造某种天然酶活性的流程示意图。构建重组质粒所需要的酶是 限制酶（限制性内切核酸酶）和DNA连接酶限制酶（限制性内切核酸酶）和DNA连接酶。
④步骤b应使用 Cacl2（或Ca2+）Cacl2（或Ca2+）（化学试剂）使受体菌处于 感受感受态；步骤c采用 抗原-抗体杂交抗原-抗体杂交技术筛选突变酶；步骤d将一轮易错PCR筛选获得的有益突变继续进行新一轮的易错PCR，通过连续易错PCR和筛选，导致酶的 定向定向进化，以获得满足人们需求的产物。
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】蛋白质工程；高温下能保持活性或耐高温；氢键；提高；DNA分子充分（完全、彻底）变性；引物与模板；限制酶（限制性内切核酸酶）和DNA连接酶；Cacl2（或Ca2+）；感受；抗原-抗体杂交；定向
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：7引用：1难度：0.7
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1．数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：7引用：2难度：0.6 -
2．科学家为了提高光合作用过程中Rubiaco酶对CO2的亲和力，利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：
（1）PCR定点突变技术属于（填“基因工程”或“蛋白质工程”）。可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的技术，才能最终获得转基因植物。
（2）PCR过程所依据的原理是。利用PCR技术扩增，若将一个目的基因复制10次，则需要在缓冲液中至少加入个引物。
（3）目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。科研人员通过实验研究发现培育的该转基因植株的光合作用速率并未明显增大，可能的原因是。
（4）另有一些科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。有关叙述错误的是。
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞的全能性最容易表达
B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达
C．人的生长激素基因能在小鼠细胞表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用
D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代发布：2025/1/16 8:0:1组卷：14引用：2难度：0.6 -
3．下列关于DNA片段扩增及其鉴定的说法错误的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：4引用：3难度：0.7
