生物工程与微生物
基因工程赋予生物新的遗传特性，如利用大肠杆菌实现人胰岛素大规模生产。图1为2种限制酶识别序列和切割点，图2为目的基因与pBR322质粒形成重组质粒的2种情况，图3为抗药性筛选流程。（注：BamHⅠ、PstⅠ、MboⅠ为限制酶，ori为复制起点，Amp为氨苄青霉素抗性基因，Tet为四环素抗性基因。上标“r”代表抗性；“s”代表敏感）。
（1）获取人的胰岛素基因（目的基因）通常有两种方法，现已得到人胰岛素mRNA分子片段序列，可通过 逆转录逆转录过程去获得胰岛素基因。
（2）大肠杆菌pBR322质粒中含有氨苄青霉素抗性基因（Amp）和四环素抗性基因（Tet），这些可供筛选使用的功能性基因称为 标记基因标记基因。
（3）据图1、2中的信息，若人胰岛素目的基因与质粒分别使用MboI和BamHⅠ不同的限制酶切开，插在质粒pBR322的BamHⅠ位点处，在形成重组质粒之后，如何重新“卸下”目的基因？为什么 可用MboI限制酶“卸下”目的基因，因为BamHI限制酶的识别序列消失了可用MboI限制酶“卸下”目的基因，因为BamHI限制酶的识别序列消失了。
（4）抗药性筛选法实施的前提条件是载体DNA携带抗生素的抗性基因。如果采用图3抗药性筛选流程，则可筛选出的含重组质粒的大肠杆菌的表现型是 BB。
A．仅AmpsTetr
B．仅AmprTets
C．AmpsTetr和AmprTets
D．AmpsTetr或AmprTets
（5）除抗药性筛选法外，显色筛选也是常用的方法。很多大肠杆菌的质粒上含有lacZ′标记基因，其表达的酶蛋白可将一种无色的化合物（X-gal）水解成蓝色产物。若重组DNA技术常用的大肠杆菌质粒pUC18同时携带Ampr和LacZ′两个标记基因，据图4分析，若想筛选出重组质粒，配制的固体培养基上，需含有 Amp和X-galAmp和X-gal，经转化、扩增、涂布，图4中含重组质粒的是 白色白色（白色/蓝色）菌落。
（6）抗药性筛选法、显色筛选同时使用与单用抗药性筛选法两者有何区别？你认为哪种方法更具有优势？为什么？
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】逆转录；标记基因；可用MboI限制酶“卸下”目的基因，因为BamHI限制酶的识别序列消失了；B；Amp和X-gal；白色
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：52引用：2难度：0.5
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