研究发现，实体肿瘤内部通常是缺氧的环境，蓖麻毒素蛋白（RTA）可作用于核糖体，使蛋白合成受阻，从而引起细胞死亡。TAT是一种短肽，可转导蛋白进入细胞，含有氧依赖性降解区域ODD（多肽）的融合蛋白可以适应低氧条件稳定存在，但在常氧条件下会被蛋白酶降解。科研人员以RTA作为抑制肿瘤细胞增殖的活性分子，利用TAT的作用将融合蛋白转运进入肿瘤细胞，并利用ODD的作用减轻RTA对正常细胞的毒性，分别构建了含TAT-RTA（660bp）和TAT-RTA-ODD（870bp）融合基因的表达载体，并成功得到相关融合蛋白。
（1）可采用PCR的方法获取融合基因TAT-RTA，需要根据TAT和RTA基因设计引物，引物的作用是

与模板DNA单链互补配对实现连接，并且使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸

与模板DNA单链互补配对实现连接，并且使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸

。已知RTA基因和欲得到的TAT-RTA融合基因的结构如图1所示，TAT基因编码链序列5'ATGAGCTACGGCCGTAAAAAGAGACGCCAACGTAGA3′，为顺利构建表达载体，需要在引物1的5′端加入

BamHⅠ

BamHⅠ

酶切位点，引物2的5′端加入

XboⅠ

XboⅠ

酶切位点，利用TAT和RTA核酸序列设计引物时，要求在RTA蛋白的前端引入TAT短肽，请根据要求写出引物1

5'GGATCCATGAGC3'

5'GGATCCATGAGC3'

（写出引物5′端的12个碱基即可）。

（2）载体的部分结构如图2所示，His标签由连续的6个组氨酸构成，可用于对重组融合蛋白进行分离纯化，将PCR得到的TAT-RTA融合基因和载体双酶切后，再用

DNA连接

DNA连接

酶连接。但是在研究时，发现融合蛋白中没有His标签蛋白，据图分析原因是

限制酶2识别序列后面的一个碱基A与His标签基因编码链的前两个碱基CA编码一个氨基酸，导致His标签基因对应的mRNA的密码子被错位读取

限制酶2识别序列后面的一个碱基A与His标签基因编码链的前两个碱基CA编码一个氨基酸，导致His标签基因对应的mRNA的密码子被错位读取

。可通过引物2的特殊设计使His标签正常表达，请结合图1和图2写出引物2

5'CTCGAGTAGAACTGGCTGCTCGGCGG3'

5'CTCGAGTAGAACTGGCTGCTCGGCGG3'

（引物中如需添加碱基补足对应的密码子，可以添加任意碱基）。
（3）科研人员将得到的重组融合蛋白经腹腔给药荷瘤小鼠（患实体肿瘤的小鼠称为荷瘤小鼠），研究荷瘤小鼠肿瘤体积变化，结果如图3所示，
请写出本实验的结果

TAT-RTA和TAT-RTA-ODD融合蛋白都可以抑制荷瘤小鼠肿瘤体积的增长，TAT-RTA-ODD融合蛋白的抑制效果更好

TAT-RTA和TAT-RTA-ODD融合蛋白都可以抑制荷瘤小鼠肿瘤体积的增长，TAT-RTA-ODD融合蛋白的抑制效果更好

。
产生该实验结果的原因是

含有氧依赖性降解区域ODD（多肽）的融合蛋白可以适应肿瘤内部低氧条件稳定存在，从而更好地抑制肿瘤体积增长

含有氧依赖性降解区域ODD（多肽）的融合蛋白可以适应肿瘤内部低氧条件稳定存在，从而更好地抑制肿瘤体积增长

。