黄萎病是一种危害棉花的常见疾病，科学工作者通过转基因技术将抗黄萎病基因——葡萄糖氧化酶基因（GO）导入棉花，获得抗黄萎病棉花。下图为构建的重组质粒的示意图，已知T-DNA上的基因在农杆菌中不能表达，而在植物细胞中能表达。回答下列问题：
（1）构建基因表达载体时，利用 限制酶和DNA连接限制酶和DNA连接酶将GO定向接入Ti质粒。Ti质粒上nptII的功能是 作为标记基因，用于鉴别、筛选含有重组质粒的受体细胞作为标记基因，用于鉴别、筛选含有重组质粒的受体细胞。
（2）在如图所示重组质粒中，目的基因的启动子和终止子应位于 GO的两端GO的两端（填“Bar的两端”或“GO的两端”或“Bar-GO的两端”）。启动子具有 驱动目的基因转录合成mRNA驱动目的基因转录合成mRNA的作用。
（3）切取经无菌培养的棉花幼苗下胚轴，直接转入含重组质粒的农杆菌培养液中侵染5～10 min后，将下胚轴放入愈伤组织诱导培养基中培养2天。成功转化的棉花细胞能在含有 草丁膦草丁膦的培养基中生长增殖，未成功转化的细胞不能在该培养基中生长增殖。为了检测转基因棉花是否含有葡萄糖氧化酶，可采用 抗原一抗体杂交抗原一抗体杂交法进行检测。
（4）若将目的基因导入动物细胞，一般采用的方法是 显微注射法显微注射法。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】限制酶和DNA连接；作为标记基因，用于鉴别、筛选含有重组质粒的受体细胞；GO的两端；驱动目的基因转录合成mRNA；草丁膦；抗原一抗体杂交；显微注射法
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：6引用：2难度：0.6
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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