当前新冠病毒的主要检测手段有核酸检测法和免疫学检测法。请回答下列问题:
(1)核酸检测方法:目前,新冠病毒的实验室检测主要依赖核酸检测,包括以下两种方法:
①全基因组测序:病原体宏基因组测序(mNGS)是目前临床实践中最常用的病原体基因测序方法。mNGS技术首先需要将病毒RNA制备成测序仪可以识别和分析的DNA文库,需要将RNA 反转录反转录产生的多种互补DNA片段,与 载体载体连接后储存在 受体菌受体菌中。然后使用测序仪对核酸序列进行检测。检测结果经生物信息学软件处理,最终展现出与病毒序列相关的信息。
②荧光PCR法:在常规PCR检测的基础上加入了荧光物质,通过监测发光信号来进行分析的一种方法。PCR利用 DNA(双链)复制DNA(双链)复制的原理,实现目的基因的扩增,该过程首先需要设计引物,国家微生物科学数据中心公布了新冠病毒S蛋白的引物序列,已知其中一段引物的序列为CCCAACTTCTCCTCCTAGAAT,能否根据该引物序列设计出另一段引物的序列?不能不能(填“能”或“不能”),原因是 DNA双链是反向平行的,复制时每条链的延伸方向都是5’-3’,该引物只能结合一条链的一端,无法据此确定另一引物的碱基序列(已知一端引物的碱基序列无法推断另一端引物的碱基序列)DNA双链是反向平行的,复制时每条链的延伸方向都是5’-3’,该引物只能结合一条链的一端,无法据此确定另一引物的碱基序列(已知一端引物的碱基序列无法推断另一端引物的碱基序列)。目前在PCR反应中使用Taq酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是 Taq酶热稳定性高,而大肠杆菌DNA聚合酶在高温下会失活Taq酶热稳定性高,而大肠杆菌DNA聚合酶在高温下会失活。TaqMan是最为常用的一种具有荧光标记的核酸探针,能与目标基因特异性结合,利用原理是 碱基互补配对原则碱基互补配对原则。
(2)免疫学检测法:该技术基于血清中抗原和抗体的特异性结合进行检测。
①制备抗体:可以用到单克隆抗体的相关技术,其过程是取产生免疫反应的 脾(B淋巴)脾(B淋巴)细胞与骨髓瘤细胞混合培养,使其融合,最后筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞,杂交瘤细胞可以在体外进行大规模培养或注射到 小鼠腹腔内小鼠腹腔内,杂交瘤细胞的培养液中需要特殊的成分,通常需要加入 血清、血浆血清、血浆等一些天然成分。
②制备抗原:对新冠病毒的主要结构蛋白基因进行扩增与克隆,构建基因的 表达载体表达载体,导入大肠杆菌得到大量相关蛋白,纯化后就可以作为抗原进行检测。
【考点】单克隆抗体及其应用;DNA片段的扩增与电泳鉴定.
【答案】反转录;载体;受体菌;DNA(双链)复制;不能;DNA双链是反向平行的,复制时每条链的延伸方向都是5’-3’,该引物只能结合一条链的一端,无法据此确定另一引物的碱基序列(已知一端引物的碱基序列无法推断另一端引物的碱基序列);Taq酶热稳定性高,而大肠杆菌DNA聚合酶在高温下会失活;碱基互补配对原则;脾(B淋巴);小鼠腹腔内;血清、血浆;表达载体
【解答】
【点评】
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发布:2024/6/27 10:35:59组卷:6引用:1难度:0.5
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