大丽轮枝菌（一种丝状真菌）是引起棉花黄萎病的主要病原菌。为观察大丽轮枝菌对棉花根侵染路径，研究人员利用绿色荧光蛋白基因（sGFP）转染大丽轮枝菌，培育出表达绿色荧光蛋白的转基因菌株，主要过程如图（图中a链和b链分别是相应基因转录模板链）。分析回答：
（1）过程①中，PCR扩增sGFP的原理是 DNA分子复制DNA分子复制，该过程除需要根据 sGFP两端的碱基序列sGFP两端的碱基序列设计特异性引物序列外，为保证sCFP正确插入到质粒中，还需要在引物的 5ˊ端添加限制酶识别序列，图中b链的黏性末端碱基序列（5ˊ→3ˊ）为 AGCTAGCT。
（2）过程①中，除了要添加模板、引物、原料外，还需添加 TaqTaq酶。若1个sGFP片段连续扩增4次，则会形成 88个两条链等长的sGFP片段，消耗 77个引物1。
（3）过程②需要的工具酶是 DNA连接酶DNA连接酶。研究中将 sGFP 插入到构巢曲霉启动子和终止子之间的目的是 保证sGFP基因可以在大丽轮枝菌细胞中表达保证sGFP基因可以在大丽轮枝菌细胞中表达。
（4）将重组质粒导入农杆菌时，需要用 Ca2+（ CaCl2）Ca2+（ CaCl2）处理农杆菌，使其转化为感受态细胞。
（5）过程③中需要配制细菌培养基，配制时要在培养基灭菌并冷却到 80℃左右后，再加入用潮霉素溶液，潮霉素不能与培养基一同灭菌的原因是 潮霉素在高温灭菌时结构会被破坏潮霉素在高温灭菌时结构会被破坏。
（6）选择过程③筛选培养得到的不同农杆菌菌落，分别提取细菌质粒DNA，并用BamHI和 HindIII完全酶切可以得到 33种长度不同的DNA片段。
（7）将导入重组质粒的农杆菌加入大丽轮枝菌的孢子细胞悬液中，在适宜条件完成转 染后利用滤膜过滤得到孢子细胞，再在真菌培养基上培养获得菌落，最终通过检测 大丽轮枝菌细胞中绿色荧光的强度大丽轮枝菌细胞中绿色荧光的强度筛选出绿色荧光蛋白旺盛表达的大丽轮枝菌。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】DNA分子复制；sGFP两端的碱基序列；AGCT；Taq；8；7；DNA连接酶；保证sGFP基因可以在大丽轮枝菌细胞中表达；Ca2+（ CaCl2）；潮霉素在高温灭菌时结构会被破坏；3；大丽轮枝菌细胞中绿色荧光的强度
【解答】
【点评】
声明：本试题解析著作权属菁优网所有，未经书面同意，不得复制发布。
发布：2024/6/27 10:35:59组卷：9引用：1难度：0.5
相似题
-
1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7 -
3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
