某研究小组从土壤中分离获得能分解纤维素的细菌（A 菌），从A菌中提取一种纤维素酶基因（CBHⅡ，长度为1.4kbp）并进行PCR扩增，然后与高效表达载体pUT质粒（长度约为11.7kbp）连接构建成重组质粒并导入A菌，从而获得分解纤维素能力更强的工程菌（B菌）。
（1）采集十样时，可以选择树林中多年落叶形成的腐殖土，原因是腐殖土中富含纤维素腐殖土中富含纤维素。采集到的样品加无菌水稀释后不需要不需要（填“需要”或“不需要”）进行灭菌处理。
（2）CBHⅡ基因两端需添加如表的相关酶切位点才能与图1所示的pUT质粒连接，因此扩增CBHⅡ基因时需在两种引物上分别添加AGATCTAGATCT序列和GGTAACCGGTAACC序列。
| 限制酶 | 识别序列及酶切位点 |
| BglⅡ | A↓GATCT |
| BstEⅡ | G↓GTAACC |
| SacⅠ | G↓AGCTC |
| MspⅠ | C↓CGG |
| BamHⅠ | G↓GATCC |
抗生素N
抗生素N
的培养基中培养，然后提取3个不同菌落的质粒分别进行双酶切验证，将酶切片段和CBHⅡ基因分别进行电泳，结果如图2所示。据此分析，菌落2、3
2、3
中成功导入了重组质粒。（4）为检测B菌的纤维素分解能力，将含有20%的纤维素的培养基分为三组，一组接种B菌，一组不做处理，一组接种
A菌
A菌
，在相同条件下培养一段时间，测培养基中纤维素含量，结果如图3所示，说明B菌分解纤维素的能力最强
B菌分解纤维素的能力最强
。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】腐殖土中富含纤维素；不需要；AGATCT；GGTAACC；抗生素N；2、3；A菌；B菌分解纤维素的能力最强
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：28引用：1难度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
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