啤酒生产需经过制麦、糖化、发酵等主要环节。糖化主要是将麦芽中的淀粉等有机物水解为小分子的过程。主要工艺流程如图1所示，请回答下列问题：

（1）大麦是啤酒发酵的重要碳源，针对制麦及糖化步骤，下列说法正确的有

②③

②③

（填序号）。
①大麦萌发时仅产生淀粉酶，几乎不产生蛋白酶
②用赤霉素处理大麦，可诱导淀粉酶的合成
③酵母不能直接利用淀粉，需要淀粉酶等将淀粉转化成酵母可利用的糖
④糖化采用的温度越高，淀粉水解速度越快
（2）啤酒发酵时具有活力的酵母需达到一定的数量，故在菌种活化的过程中，需定时取样，检测酵母的生长状况。若某次样品经2次10倍稀释后，经台盼蓝染色（体积不计），在25×16型血细胞计数板上计数

无

无

色细胞，5个中格中的细胞数为244个，该样品中活酵母细胞的密度为

1.22×10⁹

1.22×10⁹

个细胞/mL。
（3）敲除酿酒酵母中的蛋白酶基因，减少发酵液中蛋白的水解，有助于增强啤酒泡沫的稳定性，从而改善啤酒的品质。以下是某科研小组的实验：
①已知编码酵母蛋白酶A（PEP4）的基因序列如图2为非模板链）：
编码该酶的mRNA，起始端的三个密码子依次为

AUG、UUC、AGC

AUG、UUC、AGC

，终止密码子为

UGA

UGA

。
②Cas9蛋白可在人为设定的RNA序列（gRNA）引导下，在选定位点切断相应的DNA链（如图3，在DNA自我连接的修复过程中产生突变。DNA序列中含NGG的位点具有较高的编辑效率（N为任意碱基）。上述PEP4序列虚线框中有

5

5

处可作为Cas9的优选剪切位点。Cas9的剪切位点在其NGG识别位点的

3'

3'

侧。（填“5“”或“3'”）
③用酪蛋白固体培养基筛选突变体，野生型可以水解酪蛋白，在菌落周围形成透明圈。需要筛选透明圈

小

小

的菌落，表明其蛋白酶活性

弱

弱

。