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HI8L是宫颈癌病毒(一种DNA病毒)特有的蛋白。科研人员利用转基因技术在植物细胞中表达H18L用于研究。研究发现,不同植物翻译时会有偏好的密码子,若提高H18L基因中编码受体细胞偏好的密码子序列比例,将大幅度提高翻译效率。为实现上述目的,需要对H18L基因序列进行改造。原理如图所示。
步骤一:

步骤二:

回答下列问题:
(1)步骤一:将预期的碱基序列设计在PCR的引物中,制备出PCR“体系1”和“体系2”,分别进行PCR扩增。
①补全下表中的两个PCR体系的成分。
成分 PCR体系1 PCR体系2
模板
H18L基因
H18L基因
引物 a和b c和d
耐高温的DNA聚合酶(Taq酶)
耐高温的DNA聚合酶(Taq酶)
其他成分 四种脱氧核苷酸、 缓冲液等
②PCR扩增时,引物b、c与体系中加入的模板
部分结合
部分结合
(填“完全结合”或“部分结合”)。
(2)步骤二:将体系1、2的产物(即图中的ef和gh)混合后,继续进行下一次PCR反应。在该PCR反应体系中经过高温变性后,当温度下降到50℃,能够互补配对的DNA链相互结合,理论上有
4
4
种结合的可能,其中能进行进一步延伸的有
1
1
种。
(3)步骤二的最终产物即为优化后的H18L基因序列,其长度为
942
942
bp。用
BamHⅠ和Xhol
BamHⅠ和Xhol
限制酶处理该序列和载体,构建表达载体。再用
农杆菌转化
农杆菌转化
法将该载体转人植物的愈伤组织,生产H18L蛋白。
(4)上述实验中,利用引物设计实现了哪些实验目的?(请写出两条)

【答案】H18L基因;耐高温的DNA聚合酶(Taq酶);部分结合;4;1;942;BamHⅠ和Xhol;农杆菌转化
【解答】
【点评】
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发布:2024/4/20 14:35:0组卷:74引用:2难度:0.7
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    ①dCTP,dGTP,dATP
    ②dGTP,dATP,dTTP,dCTP
    ③α位被32P标记的ddTTP
    ④γ位被32P标记的ddTTP

    发布:2024/10/26 17:0:2组卷:29引用:1难度:0.6
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