HI8L是宫颈癌病毒(一种DNA病毒)特有的蛋白。科研人员利用转基因技术在植物细胞中表达H18L用于研究。研究发现,不同植物翻译时会有偏好的密码子,若提高H18L基因中编码受体细胞偏好的密码子序列比例,将大幅度提高翻译效率。为实现上述目的,需要对H18L基因序列进行改造。原理如图所示。
步骤一:

步骤二:

回答下列问题:
(1)步骤一:将预期的碱基序列设计在PCR的引物中,制备出PCR“体系1”和“体系2”,分别进行PCR扩增。
①补全下表中的两个PCR体系的成分。
成分 | PCR体系1 | PCR体系2 |
模板 |
H18L基因 H18L基因
|
|
引物 | a和b | c和d |
酶 |
耐高温的DNA聚合酶(Taq酶) 耐高温的DNA聚合酶(Taq酶)
|
|
其他成分 | 四种脱氧核苷酸、 | 缓冲液等 |
部分结合
部分结合
(填“完全结合”或“部分结合”)。(2)步骤二:将体系1、2的产物(即图中的ef和gh)混合后,继续进行下一次PCR反应。在该PCR反应体系中经过高温变性后,当温度下降到50℃,能够互补配对的DNA链相互结合,理论上有
4
4
种结合的可能,其中能进行进一步延伸的有 1
1
种。(3)步骤二的最终产物即为优化后的H18L基因序列,其长度为
942
942
bp。用 BamHⅠ和Xhol
BamHⅠ和Xhol
限制酶处理该序列和载体,构建表达载体。再用 农杆菌转化
农杆菌转化
法将该载体转人植物的愈伤组织,生产H18L蛋白。(4)上述实验中,利用引物设计实现了哪些实验目的?(请写出两条)
【考点】目的基因的筛选与获取;DNA片段的扩增与电泳鉴定.
【答案】H18L基因;耐高温的DNA聚合酶(Taq酶);部分结合;4;1;942;BamHⅠ和Xhol;农杆菌转化
【解答】
【点评】
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