科研团队通过培养基因X敲除的小鼠以确定基因X的功能。科研人员构建了基因X置换载体，主要过程如图1所示（G418可杀死动物细胞），HSV-tK基因的表达产物能将DHPG（丙氧鸟苷）转化为有毒物质而使细胞死亡；然后采用一定的方法将基因X的置换载体导入到小鼠特定细胞，在特定细胞中基因X的置换载体可以和染色体上目的基因所在区段发生同源重组，再通过筛选，即可得到打靶成功的细胞，也可以随机插入到染色体中，主要过程如图2所示；将符合要求的细胞进一步培养即可获得基因X敲除的小鼠。
（1）研究发现，热稳定DNA聚合酶不能直接启动DNA新链的合成，即不能从头合成DNA，因此PCR反应体系中必需加入 引物引物。
（2）图1中引物R1和F2的5′端分别添加了与引物FG和RG互补的序列。引物R1的5′端添加与引物FG互补序列的目的是 便于H1和GR拼接（便于形成 H1+GR融合基因）便于H1和GR拼接（便于形成 H1+GR融合基因）。在PCR5中加入的引物是 R2和FGR2和FG。
（3）图2中的细胞一般是小鼠的 胚胎干细胞（或受精卵）胚胎干细胞（或受精卵），常采用 显微注射显微注射法将基因X置换载体导入这些细胞。
（4）将置换载体导入特定细胞后，除了发生同源重组外，还会发生非同源重组，如图2所示。为筛选出成功实现预期基因敲除的细胞，对培养基的要求是 含有G418和 DHPG（丙氧鸟苷）含有G418和 DHPG（丙氧鸟苷），发生非同源重组获得的细胞不能在此培养基上存活的原因是 发生非同源重组的细胞含有 HSV一tK基因，其表达产物会将 DHPG转化为有毒物质而使细胞死亡发生非同源重组的细胞含有 HSV一tK基因，其表达产物会将 DHPG转化为有毒物质而使细胞死亡。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】引物；便于H1和GR拼接（便于形成 H1+GR融合基因）；R2和FG；胚胎干细胞（或受精卵）；显微注射；含有G418和 DHPG（丙氧鸟苷）；发生非同源重组的细胞含有 HSV一tK基因，其表达产物会将 DHPG转化为有毒物质而使细胞死亡
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：29引用：1难度：0.5
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（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
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