八氢番茄红素合酶（其基因用psy表示）和胡萝卜脱饱和酶（其基因用crl表示）共同参与β-胡萝卜素的合成。科学家将psy和crtl基因与pC1300dT载体结合后转入水稻，使水稻胚乳中富含β-胡萝卜素。pC1300dT载体含有2个T-DNA区，潮霉素抗性基因（hpt）在一个T-DNA区，目的基因在另一个T-DNA区。当双T区载体侵染植物时，2个T-DNA区独立转移。请根据以上信息回答下列问题。
（1）表达载体pC1300dT-psy/crtl的构建
psy和crtl基因均可在胚乳特异性谷蛋白启动子（Glup）的驱动下表达，并在终止子（nos）作用下终止转录过程。研究人员利用 HindⅢ和SalⅠHindⅢ和SalⅠ双酶切表达载体pC1300dT和psy基因，回收目标基因和载体片段，连接形成中间载体pC1300dT-psy。利用 EcoRI和KpnIEcoRI和KpnI双酶切 pC1300dT-psypC1300dT-psy载体和crtl基因。最后连接获得表达载体pC1300dT-psy crtl（图1）。
（2）启动子通常具有物种及组织特异性，因此Glup要能够在 水稻胚乳水稻胚乳细胞内特异性表达。
（3）若想检测目的基因是否已整合到水稻细胞染色体DNA上，可用PCR技术分别对psy/crtl 基因进行扩增检测，首先需要根据 psy和crtl 基因的脱氧核苷酸序列psy和crtl 基因的脱氧核苷酸序列分别设计两对引物，某研究人员设计引物时出错，导致图2中的②号引物不可使用，原因是 引物自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效引物自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效。
（4）通过PCR技术在水稻细胞内检测到psy/crtl基因，还不能确认转基因水稻培育成功，为什么？还需进行β-胡萝卜素含量检测（个体生物学水平的鉴定）还需进行β-胡萝卜素含量检测（个体生物学水平的鉴定）。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】HindⅢ和SalⅠ；EcoRI和KpnI；pC1300dT-psy；水稻胚乳；psy和crtl 基因的脱氧核苷酸序列；引物自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效；还需进行β-胡萝卜素含量检测（个体生物学水平的鉴定）
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：20引用：1难度：0.5
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发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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