黄曲霉素是黄曲霉菌等霉菌产生的对人和动物具有剧毒、强致癌的一类代谢产物,包括AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、AFM1等几种。其中AFB1是对玉米和花生造成污染最严重的黄曲霉素。通过制备单克隆抗体可明显提高对玉米等粮食中黄曲霉素检测的灵敏度和特异性。
(1)AFB1进入细胞后能与tRNA结合形成复合物,抑制tRNA与某些氨基酸结合,从而干扰基因表达的 翻译翻译过程。AFB1能特异性诱发人肝细胞中抑癌基因p53发生碱基对替换,从而使该基因发生 突变突变,诱发肝癌。
(2)以下是抗AFB1的单克隆抗体的简要制备思路。
①AFB1属于小分子物质,不具有刺激机体产生抗体的免疫原性,制备时需要将AFB1与某些物质结合成具有免疫原性的完全抗原。下列物质中不能参与合成完全抗原的是 c、d、ec、d、e。
a.牛血清白蛋白b.卵清蛋白 c.丙氨酸d.葡萄糖 e.香豆素
②将经完全抗原AFB1-BSA(BSA是牛血清白蛋白)免疫的小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞通过融合,经选择培养基筛选和检测等过程,最终选择出 抗体检测呈阳性的杂交瘤(能产生抗AFB1抗体的杂交瘤)抗体检测呈阳性的杂交瘤(能产生抗AFB1抗体的杂交瘤)细胞进行培养,从培养液中分离提纯得到抗AFB1的抗体。
③利用抗原—抗体杂交技术对抗AFB1抗体进行特异性和灵敏度鉴定。下表是三种抗AFBI抗体的交叉反应鉴定结果。
被测黄曲霉素 | AFB1 | AFB2 | AFG1 | AFG2 | AFM1 |
2A11交叉反应率(%) | 100 | 17.1 | 0.56 | 0.37 | 未检测到 |
3A12交叉反应率(%) | 100 | 7.8 | 20.2 | 0.6 | <0.1 |
3G1交叉反应率(%) | 100 | 6.4 | <0.1 | <0.1 | 未检测到 |
I.上述实验结果中,3种抗AFB1抗体与除AFB1外的其他黄曲霉素均能发生一定的反应,原因是
AFB1与其他黄曲霉素在结构上有相似性
AFB1与其他黄曲霉素在结构上有相似性
。Ⅱ.根据交叉反应结果,应选用能产生
3G1
3G1
抗体的杂交瘤细胞培养以获得大量的该抗体用于检测。(3)香豆素(C9H6O2)是一种对人畜低毒的AFB1结构类似物。玉米种植土壤中存在利用胞外酶降解AFB1的多种微生物。现要对已污染的玉来样品进行AFB1的微生物脱毒处理,请设计一个安全,有效的生物处理方案。
【答案】翻译;突变;c、d、e;抗体检测呈阳性的杂交瘤(能产生抗AFB1抗体的杂交瘤);AFB1与其他黄曲霉素在结构上有相似性;3G1
【解答】
【点评】
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