图甲为构建重组质粒过程中的三种备选质粒，其中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因。图乙为培育转AFPs基因（抗冻基因）番茄的示意图，外源DNA和质粒上均标出了酶切位点及相关抗性基因，请回答下列问题。
（1）图甲中通常选用质粒C构建重组质粒，而不选用质粒A或质粒B的原因分别是质粒A中没有标记基因，质粒B的复制原点中含有HindⅢ酶切位点质粒A中没有标记基因，质粒B的复制原点中含有HindⅢ酶切位点。
（2）据图乙分析，若需使用插入灭活法筛选并鉴定重组质粒，应优先选用限制酶BamHⅠ和HindⅢBamHⅠ和HindⅢ切割目的基因和质粒。
（3）通过PCR技术获取目的基因时需设计22种引物；从cDNA文库中获得的目的基因不含有不含有（填“含有”或“不含有”）启动子和终止子。
（4）在构建基因表达载体过程中常把两个启动子串联在一起形成双启动子，加在目的基因上游。双启动子的作用可能是保证目的基因的高效转录（高效表达）保证目的基因的高效转录（高效表达）。
（5）图乙农杆菌中的质粒应含有T-DNA，其作用是携带目的基因进入番茄细胞并整合到番茄细胞的染色体DNA携带目的基因进入番茄细胞并整合到番茄细胞的染色体DNA。若要获得抗冻能力更强的抗冻番茄，可以对AFPs基因进行改造，最终得到相应的蛋白质，该过程需用到蛋白质蛋白质工程。
（6）为使改造后的AFPs基因能够表达，人工设计质粒D并对它的多个酶切位点进行研究。若用HindⅢ酶或KpnⅠ酶单独切割质粒D，均获得一条长链，若用HindⅢ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个500bp和1个2666bp片段，若用KpnⅠ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个250bp和1个3166bp片段。若以HindⅢ酶切割位点为计算起点，则KpnⅠ酶切割位点与HindⅢ酶切割位点最短长度为750bp750bp，EcoRⅠ酶的两个切割位点与HindⅢ切割位点的最短距离为500bp500bp。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】质粒A中没有标记基因，质粒B的复制原点中含有HindⅢ酶切位点；BamHⅠ和HindⅢ；2；不含有；保证目的基因的高效转录（高效表达）；携带目的基因进入番茄细胞并整合到番茄细胞的染色体DNA；蛋白质；750bp；500bp
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：73引用：3难度：0.5
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
