科研人员通过转基因技术培育出超量表达P蛋白的转基因甜玉米。在超量表达P基因载体的构建中，含P基因的DNA片段以及Ti质粒的酶切位点如图所示，其中强启动子能驱动基因的持续转录。请回答下列问题。

限制酶	识别序列
ClaⅠ	5′-AT↓CGAT-3′
BamHⅠ	5′-G↓GATCC-3′
HindⅢ	5′-A↓AGCTT-3′
EcoRⅠ	5′-G↓AATTC-3′
KpnⅠ	5′-GGTAC↓C-3′
SacⅠ	5′-GAGCT↓C-3′

（1）以RNA为模板，通过RT-PCR技术可获取P基因。进行RT-PCR时一般要加入4种脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP）而不是脱氧核苷酸，其原因是

dNTP 能为子链延伸过程提供能量和原料（或脱氧核苷酸只能作为原料而不能提供能量）

dNTP 能为子链延伸过程提供能量和原料（或脱氧核苷酸只能作为原料而不能提供能量）

，同时需加入的酶有

逆转录酶和 Taq酶

逆转录酶和 Taq酶

。为了特异性扩增P基因序列，需根据

P基因两端的碱基序列

P基因两端的碱基序列

设计特异性引物。
（2）在构建基因表达载体时，应优先选用的限制酶是

BamHⅠ

BamHⅠ

和

Sac I

Sac I

，这样操作不仅使P基因在玉米植株中超量表达，还可利用T-DNA的

可转移

可转移

特性，最终使P基因

整合到玉米细胞染色体上

整合到玉米细胞染色体上

。
（3）将农杆菌液浸泡过的玉米愈伤组织进行植物组织培养时，培养基中需加入

潮霉素

潮霉素

，筛选出的愈伤组织经再分化过程形成丛芽，最终获得转基因玉米植株。
（4）对转基因再生玉米植株进行鉴定时发现，有些植株虽有P基因，但几乎没有P蛋白，造成该现象的原因可能有

基因转化过程中强启动子可能丢失或断裂，未能真正转化成功；虽然转化成功，但是P基因保持沉默，不能有效表达

基因转化过程中强启动子可能丢失或断裂，未能真正转化成功；虽然转化成功，但是P基因保持沉默，不能有效表达

。