研究发现，大部分白血病患者细胞中存在异常的融合基因UBA2-WTIP，可作为检测白血病的特异性分子标志物。科研人员通过RT-PCR方法克隆得到融合基因UBA2-WTIP，为了研究该基因的作用和致病机制，需要构建重组载体并把目的基因和FLAG标签基因序列连接起来，分别获得带有FLAG肽链的UBA2-WTIP融合蛋白和WTIP蛋白。FLAG肽链由8个氨基酸残基组成，可作为基因工程中蛋白质是否表达的标记。
（1）科研人员以提取的某白血病人外周血细胞总RNA为模板，经过 逆（反）转录逆（反）转录过程合成cDNA，设计 22种引物，经RT-PCR扩增出融合基因UBA2-WTIP.对测序结果进行数据分析，推测融合基因UBA2-WTIP是在UBA2基因的第16外显子与WTIP基因的第2外显子处拼接而成，如图1所示。为了验证该融合基因的产生是基因组DNA融合而不是不同的RNA剪接后逆转录所产生的，可通过PCR验证，其实验思路和预期结果为 提取该病人的DNA，使用图中F1和R1引物进行PCR扩增，若出现239bp扩增片段，该融合基因的融合方式是基因组水平融合提取该病人的DNA，使用图中F1和R1引物进行PCR扩增，若出现239bp扩增片段，该融合基因的融合方式是基因组水平融合。
（2）为了构建重组载体，科研人员设计了以下2种引物，如图2所示：
上游引物F：为：5'TATGGTACCATG①GCACTGTCGCGGGG3'，GGTACC为KpnⅠ酶切位点；
下游引物R为：5'TAT②TCA③GAGCTCAGTGACGTG3'；
FLAG标签基因编码链序列（5'GATTACAAGGATGACGACGATAAG3'）可以插入目的基因编码区的首端或者末端。已知引物中ATG对应起始密码。若UBA2-WTIP融合基因编码的蛋白质前端有一段信号肽，则FLAG标签基因序列一般不能插入①位置，原因是 蛋白质前端的信号肽一般会在蛋白质成熟时被切割掉，所以不能得到带有FLAG肽链的蛋白质蛋白质前端的信号肽一般会在蛋白质成熟时被切割掉，所以不能得到带有FLAG肽链的蛋白质；若在下游引物R2②③处插入FLAG标签基因序列和EcoR1酶切位点，已知引物中TCA对应终止密码，位置③处序列为5'CTTATCGTCGTCATCCTTGTAATCCTTATCGTCGTCATCCTTGTAATC3'。
（3）制备的重组载体体外转染人类白血病细胞株KG-la细胞，提取各组细胞总蛋白，用FLAG单克隆抗体检测蛋白表达情况，并分别测定转染空质粒的对照细胞、转录UBA2-WTIP融合基因及转录WTIP基因的KGla细胞增殖情况，结果分别如图3所示。
检测相关蛋白质是否表达的方法是 抗原-抗体杂交抗原-抗体杂交；上述生长曲线结果说明 UBA2-WTIP融合基因能在体外促进白血病细胞增殖，WTIP基因能抑制白血病细胞的增殖UBA2-WTIP融合基因能在体外促进白血病细胞增殖，WTIP基因能抑制白血病细胞的增殖。
【考点】基因工程的操作过程综合；DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】逆（反）转录；2；提取该病人的DNA，使用图中F1和R1引物进行PCR扩增，若出现239bp扩增片段，该融合基因的融合方式是基因组水平融合；蛋白质前端的信号肽一般会在蛋白质成熟时被切割掉，所以不能得到带有FLAG肽链的蛋白质；CTTATCGTCGTCATCCTTGTAATC；抗原-抗体杂交；UBA2-WTIP融合基因能在体外促进白血病细胞增殖，WTIP基因能抑制白血病细胞的增殖
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：67引用：1难度：0.3
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发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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