CRISPR/Cas9系统可对基因组进行定点编辑，其工作原理如图1所示。该系统主要包含单链向导RNA和Cas9酶两个部分，能特异性识别并结合特定的DNA序列，从而引导Cas9酶到相应位置并剪切DNA，最终实现对靶基因序列的编辑。请回答下列问题：
（1）图1为CRISPR/Cas9系统作用示意图，该系统能精准识别相关基因的原理是sgRNA与目标DNA发生 碱基互补配对碱基互补配对，Cas9酶可催化 磷酸二酯键磷酸二酯键（化学键名称）水解，剪切特定DNA片段。
（2）LMNA基因编码的核纤层蛋白与维持细胞核正常形态有关。科研人员利用CRISPR/Cas9技术对体外培养的HepG2（人源肺癌细胞）细胞株进行基因编辑，获得了LMNA基因敲除的稳定细胞系。
①体外培养的HepG2时需要一定比例的O2和CO2，其中CO2的主要作用是 维持培养液pH值维持培养液pH值；培养基除灭菌外还需要通过 定期更换培养液（添加一定量的抗生素/无菌操作）定期更换培养液（添加一定量的抗生素/无菌操作）来保证无菌无毒环境。
②HepG2细胞中没有编码Cas9的基因，需将Cas9基因及sgRNA基因拼接形成拼接基因并与质粒结合导入HepG2细胞，用图2中的质粒以及含Cas9-sgRNA拼接基因的DNA片段构建表达载体时，应选用 EcoRIEcoRI进行酶切。
③将构建好的表达载体与用 Ca2+（CaCl2）Ca2+（CaCl2）处理的细菌置于适宜反应体系中培养。然后将培养的细菌涂布于含 嘌呤霉素嘌呤霉素的平板培养基上，37℃培养，24h后挑取菌落，提取质粒作为模板，选择图3中引物组合 ⅡⅡ和 ⅢⅢ，通过PCR和电泳技术鉴定是否重组成功。
④用鉴定成功的工程菌对HepG2细胞进行转染，培养三天后收集HepG2细胞，提取基因组，对其 碱基/核苷酸碱基/核苷酸序列进行检测，判断Cas9-sgRNA拼接基因是否导入成功。若从细胞水平进行检测，可以检测HepG2细胞数目增长量或 细胞核形态细胞核形态。
【答案】碱基互补配对；磷酸二酯键；维持培养液pH值；定期更换培养液（添加一定量的抗生素/无菌操作）；EcoRI；Ca2+（CaCl2）；嘌呤霉素；Ⅱ；Ⅲ；碱基/核苷酸；细胞核形态
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：27引用：2难度：0.5
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（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
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