叶绿体DNA（cpDNA）大多为环状双链，其基因组序列高度保守，目前已在分子标记、核质互作、叶绿体基因工程等方面开展了广泛研究。下列为提取cpDNA的相关步骤，其中SDS能瓦解生物膜，苯酚使蛋白质变性析出，氯仿与苯酚互溶，易于除去苯酚。
（1）叶绿体的分离
①匀浆使细胞破碎；将叶片于4℃冰箱黑暗饥饿处理12～24h后，剪成1cm长度，放入匀浆机，倒入缓冲液，先低速匀浆2次，再高速匀浆3次，每次5～10s。匀浆前黑暗饥饿处理的目的是

使叶绿体中的淀粉消耗掉

使叶绿体中的淀粉消耗掉

，有利于cpDNA的提取。
②离心得到叶绿体粗提物：将匀浆液过滤后离心，弃沉淀以去除细胞残骸；将得到的上清液再次离心，弃上清，即得叶绿体粗提物，第二次离心的速度比第一次

高

高

。整个过程中线粒体分布在

上清液

上清液

中，从而避免了线粒体DNA对cpDNA的污染。
（2）去除核DNA：向叶绿体粗提物中加入

DNA酶

DNA酶

、缓冲液，37℃静置15min后，离心取

沉淀

沉淀

从而去除吸附在叶绿体外膜上的核DNA。
（3）叶绿体的裂解和cpDNA的粗提：将纯化的叶绿体加入缓冲液、SDS、蛋白酶K，55℃水浴3h,使叶绿体裂解，释放出cpDNA，离心取上清液。在上清液中加入苯酚和氯仿，离心后的液体包括上层水相、中层变性蛋白和下层有机溶剂，cpDNA分布于

上层水相

上层水相

中，小心用

移液枪（微量移液器）

移液枪（微量移液器）

吸取该层液体。
（4）沉淀cpDNA：向粗提溶液中加入3mol/L醋酸钠及预冷的

95%酒精

95%酒精

，离心取沉淀物。
（5）电泳检测cpDNA：右图1、2是某品种茶树用上述方法提取到的cpDNA凝胶电泳结果，其中M是已知大小的不同DNA的混合物。2组无条带，表明提取不成功，其可能的原因之一是操作过程中叶绿体裂解时间过长，导致

cpDNA片段断裂或降解，所提取的cpDNA含量少

cpDNA片段断裂或降解，所提取的cpDNA含量少

，
（6）叶绿体基因的遗传方式

不遵循

不遵循

（填“遵循”或“不遵循”）孟德尔遗传定律，不会随传给后代。且将外源基因转入叶绿体基因时，在转基因生物安全方面带来的优点为

花粉转入的目的基因不会随花粉飘散，污染近缘（其他）植物

花粉转入的目的基因不会随花粉飘散，污染近缘（其他）植物

。