菘蓝是常用中药板蓝根和大青叶的主要基原植物，有清热解毒、凉血利咽的功效，可防治病毒性感染。在各地广为栽培，但常因除草剂的侵害，造成质量和产量下降。链霉菌中的bar基因序列未知，其编码的乙酰转移酶能使除草剂的活性成分草丁腾失活，拟利用基因工程技术将bar基因导入菘蓝中，以获得抗除草剂的菘蓝植株。回答下列问题：
（1）为获取bar基因，需将链霉菌基因组DNA借助载体、微生物等所形成的 基因（组）文库基因（组）文库中的所有基因进行表达，并用乙酰转移酶为抗原所制备出的灵敏度高的 单克隆抗体单克隆抗体来检测表达产物。在该制备过程中，需从已免疫的小鼠 脾脏脾脏（填一器官名称）中提取B淋巴细胞，并与骨髓瘤细胞共同培养，过程中需采用 聚乙二醇、灭活的（仙台）病毒、电刺激、离心聚乙二醇、灭活的（仙台）病毒、电刺激、离心等方法诱导其融合（答出2点即可）。
（2）如图1和图2为各种限制酶的识别序列在质粒、含目的基因的DNA片段上的分布情况。在构建表达载体时，为防止DNA片段反向拼接和自身环化，需用限制酶 HindⅢ、EcoRⅠHindⅢ、EcoRⅠ（填BamHⅠ、HindⅢ、EcoRⅠ、SmaⅠ中的一种或几种）同时处理Ti质粒和含目的基因的DNA片段，并用 DNA连接酶DNA连接酶进行连接。为提高形成重组DNA的成功率，除上述处理外，还可以采用改变温度和pH等环境条件、提高DNA连接酶的浓度、提高目的基因的浓度、提高DNA连接酶的活性、提高质粒的浓度、改变质粒和目的基因的比例等提高DNA连接酶的活性、提高质粒的浓度、改变质粒和目的基因的比例等（写出两种方法即可）
（3）将bar基因导入受体细胞。转化农杆菌时应添加 CaCl2溶液CaCl2溶液以利于重组质粒进入农杆菌细胞；利用含重组质粒的农杆菌侵染称蓝的叶片时，Ti质粒上的 T-DNAT-DNA可以携带bar基因整合到菘蓝叶片细胞的染色体DNA上；将叶片转移到固体培养基上培养，培养基中加入抗生素的作用是 杀灭农杆菌杀灭农杆菌，再转移到含有 草丁膦草丁膦培养基上，筛选出已经转化的菘蓝细胞。
（4）取被侵染的菘蓝叶片组织接种到MS培养基中培养，经过 器官发生途径器官发生途径或体细胞胚发生途径形成转基因植株，该过程中利用了 植物细胞的全能性植物细胞的全能性原理。为检验bar基因是否表达，在分子水平上可用 核酸探针核酸探针来检测其转录产物。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】基因（组）文库；单克隆抗体；脾脏；聚乙二醇、灭活的（仙台）病毒、电刺激、离心；HindⅢ、EcoRⅠ；DNA连接酶；提高DNA连接酶的活性、提高质粒的浓度、改变质粒和目的基因的比例等；CaCl2溶液；T-DNA；杀灭农杆菌；草丁膦；器官发生途径；植物细胞的全能性；核酸探针
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：12引用：1难度：0.5
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
