某动物体内含有研究者感兴趣的目的基因，研究者欲将该基因导入大肠杆菌的质粒中保存。该质粒含有氨苄青霉素抗性基因（AmpR）、LacZ基因及一些酶切位点，其结构和简单的操作步骤如图所示。回答下列问题：
（1）制备重组质粒常用同种限制酶的原因是能产生 产生相同的粘性末端产生相同的粘性末端。为了使质粒DNA与目的基因能连接形成重组质粒，还需要在混合物中加 DNA连接酶DNA连接酶。
（2）培养基中除了加入大肠杆菌所必需的营养物质外，还需要添加 X-gal、氨苄青霉素X-gal、氨苄青霉素以便筛选导入目的基因的大肠杆菌。
（3）为了使大肠杆菌处于一种能 能吸收周围环境中DNA分子能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，一般先用Ca2+处理大肠杆菌细胞。
（4）将质粒和目的基因的混合物与上述处理后的大肠杆菌混匀，制备转基因大肠杆菌，取0.1ml上述溶液采用 稀释涂布平板稀释涂布平板法接种于培养基表面，在37℃下倒置培养16 h。经培养后，分别统计转目的基因大肠杆菌的菌落数和总菌落数，并计算转化效率。理论上转目的基因受体菌的菌落呈现 白白色，原因是 带有目的基因质粒的大肠杆菌便不能表达β-半乳糖苷酶，培养基中的X-gal不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落带有目的基因质粒的大肠杆菌便不能表达β-半乳糖苷酶，培养基中的X-gal不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落。实验中实际转化效率介于50%～85.7%，原因是 插入基因和质粒的浓度、限制酶和连接酶的活性、反应时间；重组质粒的浓度、受体菌的状态和密度、转化时间等插入基因和质粒的浓度、限制酶和连接酶的活性、反应时间；重组质粒的浓度、受体菌的状态和密度、转化时间等。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】产生相同的粘性末端；DNA连接酶；X-gal、氨苄青霉素；能吸收周围环境中DNA分子；稀释涂布平板；白；带有目的基因质粒的大肠杆菌便不能表达β-半乳糖苷酶，培养基中的X-gal不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落；插入基因和质粒的浓度、限制酶和连接酶的活性、反应时间；重组质粒的浓度、受体菌的状态和密度、转化时间等
【解答】
【点评】
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发布：2024/9/15 3:0:8组卷：3引用：2难度：0.6
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
