苯丙酮尿症是单基因遗传病，科学家将正常基因D导入该病患者的细胞，以治疗该病。图甲为A、B、C三种质粒，图乙为含有目的基因D的DNA片段，图丙为重组载体的示意图。Ap为氨节青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离。回答下列问题：
（1）基因工程操作的核心步骤是 基因表达载体的构建基因表达载体的构建。图甲中三种质粒适宜作为运载体的是质粒B，与另外两种质粒相比，其作为载体的优点是 有标记基因，复制原点不会被限制酶切割有标记基因，复制原点不会被限制酶切割。
（2）获取目的基因D时应选择乙图中的 PvuⅠPvuⅠ对其在的DNA进行切割。
（3）目的基因D和甲图中相应质粒连接后，得到图丙中三种方式。为选出正向连接的重组质粒，使用 EcoRⅠEcoRⅠ对质粒完全酶切后，进行电泳分析。若是正向连接载体，电泳图谱中出现长度为 1.21.2Kb和 5.55.5Kb两条带。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】基因表达载体的构建；有标记基因，复制原点不会被限制酶切割；PvuⅠ；EcoRⅠ；1.2；5.5
【解答】
【点评】
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发布：2024/8/2 8:0:9组卷：5引用：2难度：0.6
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
