神经纤毛蛋白-1（NRP-1）能在肿瘤细胞内表达，是血管内皮生长因子的新型受体，通过参与多种信号转导来促进肿瘤血管的生成。研究人员从肿瘤细胞中扩增出NRP-1基因并将其导入大肠杆菌体内进行发酵培养，分离提纯相应NRP-1，并将其免疫小鼠，为靶向治疗乳腺癌（MCF7）提供抗NRP-1的单克隆抗体（NRP-1MAb）。
（1）利用PCR技术可以从肿瘤细胞的基因组中分离扩增得到完整的NRP-1基因，其原因是使用与NRP-1基因两端特异性结合与NRP-1基因两端特异性结合的引物可以从模板DNA中扩增出该基因。该技术可用于基因工程四个基本步骤中的获取目的基因和目的基因的检测与鉴定获取目的基因和目的基因的检测与鉴定步骤。
（2）NRP-1基因表达载体的构建如图1所示。表达载体上除了标注的DNA片段外，在NRP-1基因上游还必须拥有的DNA片段（箭头所示）是启动子启动子，其作用是RNA聚合酶识别和结合的位点，启动转录RNA聚合酶识别和结合的位点，启动转录。
（3）研究人员将分离提纯的NRP-1免疫小鼠后，取其脾脏中B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，用特定的选择培养基进行筛选，在该培养基上不能存活的是未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞。选取检测抗体阳性的杂交瘤细胞进行体外培养时需要的气体环境是95%的空气和5%的CO295%的空气和5%的CO2。
（4）研究发现，NRP-1在MCF7细胞中高表达。将MCF7细胞制成单细胞悬液，等量注入4组裸鼠右前腋下，接种后3天开始给药NRP-1MAb（低剂量lmg/kg；中剂量5mg/kg；高剂量10mg/kg），共给药7次。每隔5天测算一次肿瘤的体积，如图2所示。分析图2可得出的结论是NRP-1MAb能有效地降低肿瘤的体积，中、高剂量抗体的降低效果比低剂量的更显著NRP-1MAb能有效地降低肿瘤的体积，中、高剂量抗体的降低效果比低剂量的更显著。
（5）由题中信息推测NRP-1Mab抑制肿瘤的作用机理是：NRP-1Mab与NRP-1特异性结合，阻断了血管内皮生长因子与NRP-1的结合血管内皮生长因子与NRP-1的结合，抑制了肿瘤血管生成，进而降低了肿瘤的体积。
【考点】基因工程的操作过程综合；动物细胞培养的条件与过程．
【答案】与NRP-1基因两端特异性结合；获取目的基因和目的基因的检测与鉴定；启动子；RNA聚合酶识别和结合的位点，启动转录；未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞；95%的空气和5%的CO2；NRP-1MAb能有效地降低肿瘤的体积，中、高剂量抗体的降低效果比低剂量的更显著；血管内皮生长因子与NRP-1的结合
【解答】
【点评】
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发布：2024/7/26 8:0:9组卷：14引用：4难度：0.7
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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