真核细胞基因起始转录需要有转录因子的参与。酵母细胞转录因子GAL4是组件式蛋白质，由DNA结合功能域（BD）和转录激活结构域（AD）组成，两个结构域分开时不能激活转录。如果将待测蛋白质X与BD融合，蛋白质Y与AD融合，蛋白质X和Y有相互作用时，两结构域能重新呈现完整转录因子活性，并可激活报告基因启动子，研究人员为了验证蛋白质X和Y具有相互作用，分别构建了不同的表达载体进行如图1实验。
（1）研究小组采用了如图2巢式PCR技术获取蛋白质X和Y基因的编码区序列，技术原理是利用两套PCR引物进行两轮PCR扩增，首先利用第一对引物（外引物）对目的基因所在DNA进行扩增；第二轮扩增以第一轮扩增产物为模板，利用第二对引物（内引物或巢式引物）进行扩增。常规PCR可能产生错误的目标产物，相比于常规PCR，巢式PCR获得错误目标产物概率低的原因是 如果利用外引物扩增产生了错误片段，再利用内引物扩增在错误片段上进行引物配对并扩增的概率低如果利用外引物扩增产生了错误片段，再利用内引物扩增在错误片段上进行引物配对并扩增的概率低。巢式PCR扩增蛋白质Y编码区序列时需在两个 内内（填写“内”、“外”或“内和外”）引物的5'端分别添加序列 GAATTC和 CTCGAGGAATTC和 CTCGAG。
（2）为筛选鉴定两种表达载体成功导入的营养缺陷型酵母菌，培养基中需添加物质有 adeade（用下列字母填写）。
a.氨苄青霉素
b.色氨酸
c.组氨酸
d.琼脂
e.无机盐
（3）LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以分解X-gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色；否则菌落为白色。请依据上述原理，设计实验验证蛋白质X和Y具有相互作用，写出实验思路并预期结果与结论。
①实验思路：将插入 X、Y 基因的两种表达载体，未插入X 基因的两种表达载体，未插入Y基因的两种表达载体，分别导入到营养缺陷型酵母菌细胞，在添加X-gal的固体培养基上培养，观察菌落颜色将插入 X、Y 基因的两种表达载体，未插入X 基因的两种表达载体，未插入Y基因的两种表达载体，分别导入到营养缺陷型酵母菌细胞，在添加X-gal的固体培养基上培养，观察菌落颜色。
②实验结果及结论：只有导入含 X、Y 基因的两种表达载体的一组培养基上出现蓝色菌落，说明蛋白质X和Y具有相互作用只有导入含 X、Y 基因的两种表达载体的一组培养基上出现蓝色菌落，说明蛋白质X和Y具有相互作用。
【答案】如果利用外引物扩增产生了错误片段，再利用内引物扩增在错误片段上进行引物配对并扩增的概率低；内；GAATTC和 CTCGAG；ade；将插入 X、Y 基因的两种表达载体，未插入X 基因的两种表达载体，未插入Y基因的两种表达载体，分别导入到营养缺陷型酵母菌细胞，在添加X-gal的固体培养基上培养，观察菌落颜色；只有导入含 X、Y 基因的两种表达载体的一组培养基上出现蓝色菌落，说明蛋白质X和Y具有相互作用
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/2 8:0:8组卷：42引用：1难度：0.6
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1．数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：7引用：2难度：0.6 -
2．科学家为了提高光合作用过程中Rubiaco酶对CO2的亲和力，利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：
（1）PCR定点突变技术属于（填“基因工程”或“蛋白质工程”）。可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的技术，才能最终获得转基因植物。
（2）PCR过程所依据的原理是。利用PCR技术扩增，若将一个目的基因复制10次，则需要在缓冲液中至少加入个引物。
（3）目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。科研人员通过实验研究发现培育的该转基因植株的光合作用速率并未明显增大，可能的原因是。
（4）另有一些科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。有关叙述错误的是。
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞的全能性最容易表达
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3．下列关于DNA片段扩增及其鉴定的说法错误的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：3引用：3难度：0.7
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