“多发性骨性连接综合征”是由编码成纤维细胞生长因子（FGF9）的基因突变所致，患者FGF9基因中某碱基对发生替换，使FGF9中相应的氨基酸发生替换。科研人员欲利用基因工程等技术获得含有该突变基因的模型小鼠，用来研究该病的发病机理。图1表示FGF9cDNA（由FGF9基因转录得到的mRNA逆转录而来）进行定点突变得到突变型FGF9cDNA的流程，图2为研究中所用的质粒（SpeⅠ、HindⅢ、SmalⅠ和BglⅡ分别代表相应的限制酶切割位点，以上限制酶切割产生的粘性末端不同）。请回答下列问题：
（1）图1虚线方框中的a链与d链在延伸过程中的作用是：既可作为 模板模板又可以起到相当于 引物引物的作用，使 耐高温的DNA聚合耐高温的DNA聚合酶能够从a链与d链的3’端开始连接脱氧核苷酸。经PCR后获得的产物一般通过 琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳来鉴定。
（2）基因王程操作的核心步骤是 基因表达载体的构建基因表达载体的构建。图2质粒中的C序列是 启动子启动子，它是RNA聚合酶识别和结合的部位。图1中突变型FGF9cDNA的a链所在的DNA单链为转录的模板链，则引物1和引物4的5'端需分别添加 HindⅢ和SpeⅠHindⅢ和SpeⅠ酶的识别序列，才能与图2中的质粒正确连接。
（3）将构建的重组DNA分子通过 显微注射显微注射技术导入受精卵，再经 胚胎移植胚胎移植（答1点即可）等技术使其发育成模型小鼠。
（4）科研人员发现，已转入突变型FGF9cDNA的模型小鼠并未表现出“多发性骨性连接综合征”，从分子水平上寻找原因需采用的技术有 PCR、抗原-抗体杂交技术PCR、抗原-抗体杂交技术。（答出2点）
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】模板；引物；耐高温的DNA聚合；琼脂糖凝胶电泳；基因表达载体的构建；启动子；HindⅢ和SpeⅠ；显微注射；胚胎移植；PCR、抗原-抗体杂交技术
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：50引用：4难度：0.5
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发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
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（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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