糖化酶是将淀粉转化为葡萄糖的酶，大部分野生酵母菌因缺乏糖化酶基因而不能直接利用淀粉。研究人员将经诱变处理后获取的黑曲霉菌高产糖化酶基因导入毕赤酵母GS115（对氨苄青霉素不敏感）中，构建能直接利用淀粉的工程菌，该过程所用质粒（仅示部分结构）如图1所示。质粒的外侧链为a链，内侧链为b链。基因Ampr转录的模板链属于b链的片段。三种限制酶的识别序列及切割位点见下表。请回答下列问题。
（1）为获得糖化酶高产菌株，研究人员将经诱变处理后的黑曲霉菌接种到 淀粉淀粉含量高的培养基上，恒温培养适宜时间后滴加碘液，挑选出透明圈（不产生蓝色）直径 较大较大（填“较大”或“较小”）的菌株。再进行复筛以及稳定性遗传实验。
（2）质粒复制的模板链是 a和ba和b（选填“a”、“b”、“a和b”、“a或b”）链。高产糖化酶基因插入质粒后，其转录的模板链属于 aa链的片段。
| 限制酶 | BamHⅠ | PstⅠ | XbaⅠ | |
| 识别序列和切割位点（5'→3'） | G↓GATCC | C↓TGCAG | T↓CTAGA | |
|
相关结构： PAOXI：甲醇诱导型强启动子 TAOXI：终止子 HIS4：组氨酸脱氢酶基因，其表达产物催化组氨酸合成 Orl：复制原点 Ampr：氨苄青霉素抗性基因 |
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BamHI和XbaI
BamHI和XbaI
（BamHⅠ/PstⅠ/XbaⅠ）酶识别序列，则PCR扩增时引物的减基序列为 ①④
①④
。（多选）
①5'-TCTAGATCTGTTGAAT-3'②5'-TCTAGAAGACAACTTA-3'
③5'-CTGCAGCTTGGATGAT-3'④5'-GGATCCCTTGGATGAT-3'
⑤5'-GGATCCGAACCTACTA-3'⑥5'-CTCGAGTCTGTTGAAT-3'
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】淀粉；较大；a和b；a；BamHI和XbaI；①④
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/28 8:0:9组卷：17引用：2难度：0.5
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
