普通棉花中含β甘露糖苷酶基因（ChMmaA2），能在纤维细胞中特异性表达，产生的β甘露糖苷酶催化半纤维素降解，棉纤维长度变短。为了培育新的棉花品种，科研人员构建了反义GhMnaA2基因表达载体，利用农杆菌转化法导入棉花细胞，成功获得转基因棉花品种，具体过程如图。请分析回答：
（1）纤维细胞E6启动子的元素组成为 C、H、O、N、PC、H、O、N、P基因表达载体除了图示组成外，至少还有 复制原点、终止子、标记基因复制原点、终止子、标记基因等（至少答两个），不能使用质粒1中花椰菜病毒启动子的原因是 纤维细胞中的RNA聚合酶不能识别和结合花椰菜病毒启动子，反义GhMnaA2不能转录产生mRNA纤维细胞中的RNA聚合酶不能识别和结合花椰菜病毒启动子，反义GhMnaA2不能转录产生mRNA
（2）PCR技术扩增β-甘露糖苷酶基因需要根据 GhMnaA2两端部分核苷酸序列GhMnaA2两端部分核苷酸序列，设计特异性引物序列，假设开始时模板DNA数量为m个，PCR扩增5个循环，理论上需要的引物数量 62m62m，为保证ChMnaA2能插入到质粒2中，还需要在引物的 5′5′端添加限制酶识别序列。
（3）③过程中用酶切法可鉴定正、反义表达载体。用SmaⅠ酶和NotⅠ酶切割正义基因表达载体获得0.1kb、3.2kb、5.8kb、8.6kb四种长度的DNA片段，则用NotⅠ酶切反义基因表达载体获得DNA片段的长度应是5.9kb5.9kb和 11.8kb11.8kb。
（4）导入细胞内的反义GhMnaA2能阻止β-甘露糖甘酶合成，使棉纤维变长的原理是 反义GhMnaA2转录的反义RNA能与棉花细胞内的GhMnaA2转录的mRNA互补配对，从而抑制基因的表达反义GhMnaA2转录的反义RNA能与棉花细胞内的GhMnaA2转录的mRNA互补配对，从而抑制基因的表达。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】C、H、O、N、P；复制原点、终止子、标记基因；纤维细胞中的RNA聚合酶不能识别和结合花椰菜病毒启动子，反义GhMnaA2不能转录产生mRNA；GhMnaA2两端部分核苷酸序列；62m；5′；5.9kb；11.8kb；反义GhMnaA2转录的反义RNA能与棉花细胞内的GhMnaA2转录的mRNA互补配对，从而抑制基因的表达
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/16 8:0:10组卷：11引用：2难度：0.5
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
