酵母菌絮凝是指菌体细胞间通过细胞壁相互粘附、聚集成团的现象。适当提高酵母的絮凝能力，有助于发酵后细胞和产物的分离，节约生产成本。科研人员为研究R基因对酵母菌絮凝性能的影响，用基因工程技术获得了R基因被敲除的酵母菌菌株，主要步骤如图1（G418为一种氨基糖苷类抗生素）。据图回答：

（1）过程①，引物2和引物4分别添加了MluⅠ的识别序列，则引物1和引物3的5'端分别添加

BamHⅠ、HindⅢ

BamHⅠ、HindⅢ

的识别序列，PCR获取R基因左右两端的N和C片段过程中，除图中条件外，还需提供

dNTP、Taq酶、缓冲液、Mg²⁺

dNTP、Taq酶、缓冲液、Mg²⁺

等条件（至少写三个）。
（2）利用含

G418

G418

的培养基筛选出重组酵母，再挑取单菌落进行PCR扩增，验证酵母细胞R基因是否被敲除，则扩增时选择引物组合是

引物1和引物3

引物1和引物3

。
（3）科研人员继续将野生酵母菌和R基因敲除酵母菌的菌液接种到装有麦芽汁的锥形瓶中，一定条件下静置发酵7天，测定酒精发酵能力和絮凝能力，结果如下表。

指标种类	酒精发酵能力	絮凝能力
野生酵母菌	4.5%	63.1%
R基因敲除酵母菌	4.5%	83.1%

①酒精发酵期间，每个锥形瓶应注意保持

密封

密封

条件和定期排气。
②实验结果表明，R基因敲除酵母菌是否符合生产需求？请说出你的判断依据。

符合，R基因敲除后酵母菌的发酵能力不变，而絮凝能力增强

符合，R基因敲除后酵母菌的发酵能力不变，而絮凝能力增强

。
（4）科研人员又将不同浓度梯度的R基因敲除酵母菌菌液和野生酵母菌菌液点样于含30g/mL钙荧光白（细胞壁抑制剂，破坏细胞壁的正常组装）的YPD培养基上，结果如图2。推测R基因敲除酵母菌絮凝能力变化的原因是

R基因缺失增强了酵母菌对细胞壁抑制剂的耐性，絮凝能力增强

R基因缺失增强了酵母菌对细胞壁抑制剂的耐性，絮凝能力增强

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