四环素被广泛应用于治疗动物的细菌感染，但残留在动物组织中的四环素通过食物链进入人体，会影响人类健康。科研人员获得了如图 1 所示的 DNA 片段，用于构建可检测四环素的大肠杆菌。
（1）启动子 A 和启动子 B都是一段有特殊碱基序列结构的DNA片段，均含有 RNA聚合RNA聚合酶识别和结合的位点。
（2）为将片段1和片段2连接，需使用 ClaⅠ和DNA连接酶ClaⅠ和DNA连接酶酶处理二者。在答题卡的框中画出二者连接后形成的融合基因（标注启动子、基因、终止子和酶切位点） 
。
（3）为将融合基因构建进入图2所示的载体质粒中，应使用限制酶 SpeⅠ和BamHⅠSpeⅠ和BamHⅠ切割载体质粒，用限制酶 XbaⅠ和BamHⅠXbaⅠ和BamHⅠ切割融合基因，选择上述限制酶的理由是 XbaⅠ和SpeⅠ可切出相同的黏性末端，可将融合基因左侧连入载体；BamHⅠ切割可将融合基因右侧连入载体XbaⅠ和SpeⅠ可切出相同的黏性末端，可将融合基因左侧连入载体；BamHⅠ切割可将融合基因右侧连入载体。
（4）利用Ca2+处理大肠杆菌使之处于 易于接受外源DNA易于接受外源DNA的状态，获得含有图示序列的表达载体。
（5）写出判定转基因大肠杆菌可检测的最低四环素浓度的实验思路，并预期实验结果 实验思路：配制一系列含不同浓度四环素的培养基用于培养转基因大肠杆菌，观察大肠杆菌中绿色荧光强度。
预期结果：能出现绿色荧光的最低四环素浓度，即为其可检测的最低浓度实验思路：配制一系列含不同浓度四环素的培养基用于培养转基因大肠杆菌，观察大肠杆菌中绿色荧光强度。
预期结果：能出现绿色荧光的最低四环素浓度，即为其可检测的最低浓度。
预期结果：能出现绿色荧光的最低四环素浓度，即为其可检测的最低浓度
预期结果：能出现绿色荧光的最低四环素浓度，即为其可检测的最低浓度
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】RNA聚合；ClaⅠ和DNA连接酶；；SpeⅠ和BamHⅠ；XbaⅠ和BamHⅠ；XbaⅠ和SpeⅠ可切出相同的黏性末端，可将融合基因左侧连入载体；BamHⅠ切割可将融合基因右侧连入载体；易于接受外源DNA；实验思路：配制一系列含不同浓度四环素的培养基用于培养转基因大肠杆菌，观察大肠杆菌中绿色荧光强度。
预期结果：能出现绿色荧光的最低四环素浓度，即为其可检测的最低浓度
；SpeⅠ和BamHⅠ；XbaⅠ和BamHⅠ；XbaⅠ和SpeⅠ可切出相同的黏性末端，可将融合基因左侧连入载体；BamHⅠ切割可将融合基因右侧连入载体；易于接受外源DNA；实验思路：配制一系列含不同浓度四环素的培养基用于培养转基因大肠杆菌，观察大肠杆菌中绿色荧光强度。预期结果：能出现绿色荧光的最低四环素浓度，即为其可检测的最低浓度
【解答】
【点评】
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发布：2024/8/26 3:0:8组卷：12引用：2难度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
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（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
