美西螈具有很强再生能力。研究表明，美西螈的巨噬细胞在断肢再生的早期起重要作用。为研究巨噬细胞的作用机制，科研人员制备了抗巨噬细胞表面标志蛋白CD14的单克隆抗体，具体方法如下、回答下列问题：

（一）基因工程抗原的制备
（1）根据美西螈CD14基因的核苷酸序列，合成引物，利用PCR扩增CD14片段。已知DNA聚合酶催化引物的3-OH与加入的脱氧核苷酸的5-P形成磷酸二酯键，则新合成链的延伸方向是

5'→3'

5'→3'

（填“5'→3'”或“3'→5'”）。
（2）载体和CD14片段的酶切位点及相应的酶切抗性基因序列如图1所示。用XhoⅠ和SalⅠ分别酶切CD14和载体后连接，CD14接入载体时会形成正向连接和反向连接的两种重组DNA。

可以

可以

（可以/不能）用这两种限制酶对CD14的连接方向进行鉴定，理由是

若是正向连接，XhoⅠ和SalⅠ能分别识别各自的特异性序列，并将CD14切下。若是反向连接，重组DNA没有XhoⅠ和SalⅠ能识别的特异性序列

若是正向连接，XhoⅠ和SalⅠ能分别识别各自的特异性序列，并将CD14切下。若是反向连接，重组DNA没有XhoⅠ和SalⅠ能识别的特异性序列

。
培养能表达CD14蛋白的大肠杆菌，分离纯化目的蛋白。
（二）抗CD14单克隆抗体的制备流程如图2所示：
（3）步骤①和步骤⑤分别向小鼠注射

CD14蛋白

CD14蛋白

和

能产生CD14抗体的杂交瘤细胞

能产生CD14抗体的杂交瘤细胞

。
（4）步骤②所用的SP2/0细胞的生长特点是

能无限增殖

能无限增殖

。
（5）吸取③中的上清液到④的培养孔中，根据抗原一抗体杂交原理，需加入

标记的CD14蛋白

标记的CD14蛋白

进行专一抗体检测，检测过程发现有些杂交瘤细胞不能分泌抗CD14抗体，原因是

形成杂交瘤细胞的B淋巴细胞种类多，有的不能分泌抗CD14抗体

形成杂交瘤细胞的B淋巴细胞种类多，有的不能分泌抗CD14抗体

。
（6）步骤⑥从

小鼠腹水

小鼠腹水

中提取到大量的抗CD14抗体，用于检测巨噬细胞。