番茄红素是类胡萝卜素的一种，存在于番茄、西瓜等水果及一些蔬菜中，是目前自然界中存在的抗氧化、抗衰老和预防肿瘤能力最强的物质之一，经研究发现合成番茄红素的功能基因是CrtE、CrtB与Crtl。为解决植物提取法产量低的问题，研究人员试通过基因工程技术来获得大量的番茄红素。请回答下列问题：
（1）为提高转化效率，研究者根据CrtE、CrtB与Crtl基因序列及其蛋白产物等，将三个基因优化设计为CrtEBI基因，并通过 化学（人工）化学（人工）法获得了该基因。为了使目的基因能与表达载体正确连接，需在目的基因的两端加上 合成两种不同限制酶识别序列合成两种不同限制酶识别序列。
（2）利用 （两种不同）限制酶与DNA连接酶（两种不同）限制酶与DNA连接酶酶将含有CrtEBI基因的DNA片段与质粒pTRC99a相连。使用CaCl2处理大肠杆菌，使细胞处于一种 能吸收周围环境中DNA分子能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，进而将重组表达载体倒入其中。
（3）待培养12h后，挑取单菌落进行PCR验证以确定受体细胞是否被成功导入目的基因。若扩增后的DNA样品电泳结果如图1，则图2（深色部分为目的基因区段）中对应泳道1和泳道2的引物组合分别为 3、43、4和 1、21、2。（填序号）
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】化学（人工）；合成两种不同限制酶识别序列；（两种不同）限制酶与DNA连接酶；能吸收周围环境中DNA分子；3、4；1、2
【解答】
【点评】
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发布：2024/5/10 8:0:9组卷：1引用：1难度：0.5
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7 -
3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
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