CRISPR/Cas9是一种高效的基因编辑技术，Cas9基因表达的Cas9蛋白像一把“分子剪刀”，在单链向导RNA（SgRNA）引导下，切割DNA双链以敲除目标基因或插入新的基因。CRISPR/Cas9基因编辑技术的工作原理如图所示。回答相关问题：
（1）过程①中，为构建CRISPR/Cas9重组质粒，需用 同种限制酶同种限制酶对含有特定SgRNA编码序列的DNA以及质粒进行酶切处理，再用 DNA连接酶DNA连接酶催化进行连接。
（2）构建完成CRISPR/Cas9重组质粒后，需要采用 PCRPCR技术对其进行扩增，其原理是 DNA半保留复制DNA半保留复制。
（3）过程②中，若受体细胞是大肠杆菌细胞，则导入前需要用 Ca2+Ca2+对其进行处理，使其处于一种 能吸收周围环境中DNA分子的能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。
（4）过程③～⑤中，SgRNA与Cas9蛋白形成复合体，该复合体中的SgRNA可识别并与目标DNA序列特异性结合，此过程发生了碱基互补配对，和SgRNA中A、G配对的碱基分别是 T、CT、C。Cas9蛋白切割基因组DNA时，断开的是 磷酸二酯磷酸二酯键。
【答案】同种限制酶；DNA连接酶；PCR；DNA半保留复制；Ca2+；能吸收周围环境中DNA分子的；T、C；磷酸二酯
【解答】
【点评】
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发布：2024/5/7 8:0:9组卷：7引用：2难度：0.5
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7
