图1是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，载体质粒P0具有四环素抗性基因（tel′）和氨苄青霉素抗性基因（amp′）。请回答下列问题：
（1）EcoRⅤ酶切位点为
，EcoRⅤ酶切出来的线性载体P1为 平平末端。
（2）用耐高温的DNA聚合酶进行PCR扩增获得的目的基因片段，其两端各自带有一个腺嘌呤脱氧核苷酸。载体P1用酶处理，在两端各添加了一个碱基为 胸腺嘧啶（T）胸腺嘧啶（T）的脱氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段在 DNA连接DNA连接酶作用下，形成重组质粒P3。
（3）筛选含有重组质粒P3的菌落首先在含 氨苄青霉素氨苄青霉素的培养基上进行。
（4）为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR鉴定。图2所示为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置，PCR鉴定时应选择的一对引物是 乙、丙乙、丙。某学生尝试用图中另外一对引物，从某一菌落的质粒中扩增出了400bp的片段，原因是 目的基因反向连接目的基因反向连接。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】平；胸腺嘧啶（T）；DNA连接；氨苄青霉素；乙、丙；目的基因反向连接
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/11 8:0:9组卷：20引用：1难度：0.6
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发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
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（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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