金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在于动植物中具有金属结合能力的蛋白质，决定该蛋白质合成的基因结构如图1所示，其中A链为编码链、B链为模板链。科研人员利用图2所示质粒构建枣树的MT基因重组DNA分子并导入大肠杆菌细胞，获得对重金属镉（Cd）具有吸附能力和耐受能力的MT工程菌。回答下列问题：
（注：XhoⅠ、KpnⅠ、PstⅠ为不同限制酶的识别位点：LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以催化无色物质X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色：amp基因为氨苄青霉素抗性基因。）
（1）获取目的基因提取枣树细胞的 mRNAmRNA，经逆转录获得cDNA：为了使PCR扩增后的产物按照正确的方向与已被酶切的载体连接，克隆MT基因时应选择的引物组合是 引物Ⅱ和引物Ⅲ引物Ⅱ和引物Ⅲ，并在其 5'5'（填“5′或3′”）末端分别添加限制酶 KpnI和XhoIKpnI和XhoI的识别序列。
（2）构建重组DNA分子启动子是 RNA聚合酶RNA聚合酶识别并结合的部位：基因工程中构建用于原核生物的表达载体时，常用的启动子不包括以下哪一项？DD。（A、噬菌体基因启动子B、乳酸菌基因启动子C、大肠杆菌基因启动子D、枣树MT基因启动子）
（3）导入、筛选和鉴定MT工程菌。
①将得到的混合物导入到用 Ca2+Ca2+处理的大肠杆菌完成 转化转化实验。
②将菌液稀释并涂布在含X-gal和氨苄青霉素的培养基上进行培养后，随机挑取 白色白色的单菌落可获得MT工程菌。
③欲进一步对MT工程菌进行鉴定，可将挑取出的MT工程菌与 普通大肠杆菌普通大肠杆菌分别接种至含 （一定浓度的重金属）镉（一定浓度的重金属）镉的LB液体培养基中，置于恒温培养箱中培养，适宜时间后检测菌种数量。
（4）扩大菌种将MT工程菌接种至发酵罐内进行扩增，培养过程中可定期取样并使用细菌计数板对 菌体菌体（填“菌体”或“菌落”）进行直接计数，以评估增殖情况。发酵结束后，采用 过滤、沉淀过滤、沉淀等方法获得所需的发酵产品。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】mRNA；引物Ⅱ和引物Ⅲ；5'；KpnI和XhoI；RNA聚合酶；D；Ca2+；转化；白色；普通大肠杆菌；（一定浓度的重金属）镉；菌体；过滤、沉淀
【解答】
【点评】
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发布：2024/8/2 8:0:9组卷：14引用：4难度：0.5
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发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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