新疆长绒棉品质优良，供不应求，而普通棉花中β一甘露糖苷酶基因（GhMnaA2）表达出的3-甘露糖苷酶能催化半纤维素降解，使棉纤维长度变短。为了培育长绒棉，科研人员构建了反义GhMnaA2基因表达载体，获得了转基因长绒棉新品种，具体过程如图所示（SmaⅠ、NotⅠ、HindⅢ和BamHⅠ为不同限制酶，LB为T-DNA左边界，RB为T-DNA右边界）。回答下列问题。
（1）过程①中不用限制酶NotⅠ的原因是 限制酶NotⅠ会破坏目的基因，且质粒上没有NotⅠ的切割位点限制酶NotⅠ会破坏目的基因，且质粒上没有NotⅠ的切割位点。GhMnaA2的序列中包含内含子等序列，可增大重组质粒的分子量，使导入效率降低，请提出一个解决此问题的方案：从棉花细胞中提取GhMnaA2的mRNA，逆转录获得GhMnaA2的cDNA从棉花细胞中提取GhMnaA2的mRNA，逆转录获得GhMnaA2的cDNA。
（2）基因表达载体除图示组成外，至少还有 终止子、复制原点终止子、复制原点。转基因长绒棉植株无图中的抗生素抗性，原因是 抗生素抗性基因不在T一DNA左右边界范围内，无法整合到棉花细胞的DNA上抗生素抗性基因不在T一DNA左右边界范围内，无法整合到棉花细胞的DNA上。
（3）过程③中目的基因导入棉花细胞后，可采用 PCRPCR等技术从分子水平上检测目的基因是否插入到棉花的染色体DNA上；个体水平上的鉴定方法是 观察转基因棉花的棉纤维是否变长观察转基因棉花的棉纤维是否变长。
（4）由图分析可知，转基因长绒棉棉纤维较普通棉棉纤维长的原因是 转基因长绒棉细胞内的反义GhMnaA2转录的mRNA能与细胞内的GhMnaA2转录的mRNA互补配对，从而抑制该基因的表达，缺少3-甘露糖苷酶，半纤维素不被降解，从而使转基因长绒棉的棉纤维长于普通棉花转基因长绒棉细胞内的反义GhMnaA2转录的mRNA能与细胞内的GhMnaA2转录的mRNA互补配对，从而抑制该基因的表达，缺少3-甘露糖苷酶，半纤维素不被降解，从而使转基因长绒棉的棉纤维长于普通棉花。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】限制酶NotⅠ会破坏目的基因，且质粒上没有NotⅠ的切割位点；从棉花细胞中提取GhMnaA2的mRNA，逆转录获得GhMnaA2的cDNA；终止子、复制原点；抗生素抗性基因不在T一DNA左右边界范围内，无法整合到棉花细胞的DNA上；PCR；观察转基因棉花的棉纤维是否变长；转基因长绒棉细胞内的反义GhMnaA2转录的mRNA能与细胞内的GhMnaA2转录的mRNA互补配对，从而抑制该基因的表达，缺少3-甘露糖苷酶，半纤维素不被降解，从而使转基因长绒棉的棉纤维长于普通棉花
【解答】
【点评】
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发布：2024/7/19 8:0:9组卷：3引用：2难度：0.5
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发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7
