科学家研究嗜热土壤芽孢杆菌得出这种杆菌能产生β葡萄糖苷酶（BglB），这是一种耐热纤维素酶，为了在工业生产中更好地应用，开展了以下试验，依题回答下列问题。
Ⅰ.利用大肠杆菌表达BglB酶
（1）PCR扩增BglB基因时，需要的条件有 目的基因、四种游离的脱氧核苷酸、引物、耐高温的DNA聚合酶目的基因、四种游离的脱氧核苷酸、引物、耐高温的DNA聚合酶（至少答3点）。
（2）如图1为质粒限制酶切图谱。BglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的BglB基因重组进该质粒，扩增的BglB基因两端需分别引入 NdeINdeI和 BamHIBamHI限制酶的识别序列。
（3）大肠杆菌不能降解纤维素，原因是 不能产生分解纤维素的有关酶不能产生分解纤维素的有关酶，但转入上述构建好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为 转基因的大肠杆菌合成出有活性的BglB酶转基因的大肠杆菌合成出有活性的BglB酶。
Ⅱ.温度对BglB酶活性的影响
（4）据图2、3可知，80℃保温时间达到 3030分钟后，BglB酶会失活；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在 BB（单选）。
A．50℃
B．60℃
C．70℃
D．80℃
注：酶的热稳定性是酶在一定温度下，保温一段时间后通过其活性的保持程度来反映的
Ⅲ.鉴定筛选出的大肠杆菌菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒
（5）为鉴定筛选出的大肠杆菌菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR鉴定。图4所示甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中相应位置，PCR鉴定时应选择的一对引物是 乙和丙乙和丙。某学生尝试用图中另外一对引物，结果从某一菌落的质粒中扩增了400bp片段，原因是 目的基因反向连接目的基因反向连接。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】目的基因、四种游离的脱氧核苷酸、引物、耐高温的DNA聚合酶；NdeI；BamHI；不能产生分解纤维素的有关酶；转基因的大肠杆菌合成出有活性的BglB酶；30；B；乙和丙；目的基因反向连接
【解答】
【点评】
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发布：2024/7/8 8:0:10组卷：2引用：2难度：0.6
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（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
