DNA分子杂交时，常需要大量的单链DNA探针。不对称PCR是一种常见的单链DNA探针制备方法，其原理是反应体系中加入一对数量不相等的引物。在PCR反应的早期10-15个循环中，扩增产物主要是双链DNA，当后期数量较少的限制性引物耗尽后，数量较多的非限制性引物将引导合成大量目标DNA单链。
（1）若A链为所需的DNA分子探针，则非限制性引物应选用引物 ⅣⅣ；PCR反应缓冲体系中一般要添加 Mg2+Mg2+以激活耐高温的DNA聚合酶。
（2）进行最初10-15个循环的目的是 增加模板DNA的量增加模板DNA的量。如果体系中原模板DNA的数量为a,最初10次循环产物为双链，后15次循环产物为单链，则最终获得的单链探针数为 15×210•a15×210•a。因为DNA单链与双链的分子量不同，可通过 （琼脂糖凝胶）电泳（琼脂糖凝胶）电泳将单链探针DNA分离出米。
（3）为精确控制产物生成量，科学家尝试设计了较长的非限制性引物与较短的限制性引物，在进行一定的循环次数后，适当提高复性温度以避免残留限制性引物与模板结合。高复性温度条件下限制性引物不能结合模板链的原因是 引物越短，复性时可与模板链形成的氢键数越少，越容易被高温破坏引物越短，复性时可与模板链形成的氢键数越少，越容易被高温破坏。
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】Ⅳ；Mg2+；增加模板DNA的量；15×210•a；（琼脂糖凝胶）电泳；引物越短，复性时可与模板链形成的氢键数越少，越容易被高温破坏
【解答】
【点评】
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发布：2024/9/9 0:0:8组卷：8引用：2难度：0.6
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1．科学家为了提高光合作用过程中Rubiaco酶对CO2的亲和力，利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：
（1）PCR定点突变技术属于（填“基因工程”或“蛋白质工程”）。可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的技术，才能最终获得转基因植物。
（2）PCR过程所依据的原理是。利用PCR技术扩增，若将一个目的基因复制10次，则需要在缓冲液中至少加入个引物。
（3）目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。科研人员通过实验研究发现培育的该转基因植株的光合作用速率并未明显增大，可能的原因是。
（4）另有一些科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。有关叙述错误的是。
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞的全能性最容易表达
B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达
C．人的生长激素基因能在小鼠细胞表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用
D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代发布：2025/1/16 8:0:1组卷：14引用：2难度：0.6 -
2．数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：7引用：2难度：0.6 -
3．下列关于DNA片段扩增及其鉴定的说法错误的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：3引用：3难度：0.7
